医学微生物学精品课件：实验8.pptVIP

* * 1. 血浆凝固酶试验结果观察（2） 2. 肠道杆菌生化反应示教 3. 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定（2） 4. 肥达氏反应结果的判定及分析（2） 5. 抗酸染色法 6. 细菌及其他微生物形态示教 实验八 主要内容 血浆凝固酶试验结果观察：将试管微微倾斜，凡血浆呈胶冻状者为阳性，仍呈液体者为阴性。 阳性反应 阴性反应 不凝固 少量、零散凝固 明显的块状凝固 巨大块凝固 完全凝固，倒置不流动 肠道杆菌生化反应示教 1．伊红美蓝培养基：除含有基础培养基的成份外，还含有乳糖及指示剂 ——伊红和美蓝。大肠杆菌能分乳糖产酸，使局部pH值下降，伊红与美蓝结合成一种黑色化合物，故菌落呈紫黑色或紫红色；肠道致病杆菌不分解乳糖，故菌落为无色半透明。 乳糖 葡萄糖 大肠杆菌 痢疾杆菌 - + 伤寒杆菌 - + 副伤寒杆菌 - ⊕ ⊕ ⊕ （黄色）酚红（红色） 酸pH6.5 碱pH7.4 2．双糖铁培养基：除含有基础培养基的成份外，还在每100ml培养基中加入1g乳糖、0.1g 葡萄糖、 0.5g硫酸亚铁、0.025g 酚红、琼脂1g。 开始反应时 18~24小时后 18~24小时后 若细菌既能分解葡萄糖又能分解乳糖 ——全黄 若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖 ——上红下黄 若细菌产生H2S可与硫酸亚铁结合 ——黑色硫化铁 酸pH6.5 碱pH7.4 （黄色）酚红（红色） （黄色）溴甲酚紫（紫色） 酸pH5.2 碱pH6.8 3.五（单）糖发酵管：在蛋白胨水培养基中分别加入葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖及指示剂溴甲酚紫。若细菌分解培养基中的糖类产酸，培养基pH值降低，溴甲紫指示剂由紫色变为黄色，如产气则小导管中有气泡。 — + ⊕ 4.靛基质（吲哚）试验：有些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中蛋白胨内的色氨酸产生靛基质（吲哚）。吲哚本身无色，当加入对二甲基氨基苯甲醛（靛基质试剂），吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物（阳性反应）。 大肠杆菌（接触面呈玫瑰红） 沙门菌 （接触面呈黄色） + + + + + — + — — — — +/— /— — — — — + — + + +/— + — — +/— — — +/— ++++ + +/— — 全黄 上红下黄 上红下黄 上红下黄 上红下黄 上红下黄 有色菌落 无色菌落 无色菌落 无色菌落 无色菌落 无色菌落 大肠杆菌 甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌 丙型副伤寒杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 动力 吲哚试验 五糖管 葡、乳、麦、甘、蔗 H2S试验 双糖铁培养基 选择鉴别 培养基 肠道杆菌 肠道杆菌的生化反应及动力 + + + + + + + + — — + + + + + + 常见沙门菌的抗原成份 -1、21、21、51、5-- a biecdg、m 1、2、121、4、5、121、4、5、126、7、Vi6、79、12、Vi1、9、12 甲型副伤寒沙门菌乙型副伤寒（肖氏）沙门菌鼠伤寒沙门菌丙型副伤寒（希氏）沙门菌猪霍乱沙门菌伤寒沙门菌肠炎沙门菌 ABCD 第2相 第1相 H抗原 O抗原 菌 名 组 抗e 抗a 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定 标本 选择鉴别培养基 （伊红美蓝培养基） 生化反应 血清学鉴定 双糖铁培养基 已知Ab检测未知Ag （玻片凝集试验） 五糖发酵 H2S试验 吲哚试验 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定（2） [步骤与方法] 2．取出伊红美蓝培养基，观察菌落的颜色、大小、透明度。如若检查沙门氏菌或志贺氏菌，应在鉴别培养基上选取乳糖不发酵的无色菌落；如检查致病性大肠杆菌，则应选取发酵乳糖的有色菌