医学微生物学精品课件：实验5.pptVIP

* * 实验五 主要内容 （一） 凝集反应 （二） 补体结合反应 （三） 血清总补体测定 颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。 凝集反应 直接凝集反应：玻片法、试管法。 间接凝集反应 抗人球蛋白试验 凝集反应 试管凝集反应（4人一组） 试管凝集反应为一种定性、半定量试验，用已知的颗粒性抗原检测血清中未知抗体及相对含量。 利用生理盐水将待检血清在试管中进行连续倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，经过一定时间后，观察有无凝集并根据凝集程度判定血清中抗体的效价。 1:10溶血素0.5ml 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 [步骤与方法] 1．取小试管7支，排列于试管架上并做好标记。 2．每管各加入生理盐水0.5ml。 3．吸取1 : 10绵羊红细胞免疫血清（溶血素）0.5ml放入第1管中充分混匀。 4．自第1管中吸出0.5ml加入第2管中，经充分混匀后吸出0.5ml加入第3管中，如此依次稀释至第6管，混匀后吸出0.5ml弃去，第7管不加血清做对对照。 弃去0.5ml 1%绵羊红细胞 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 对照 5．1~7管每管各加入1%绵羊红细胞（SRBC）悬液各0.5ml（注意：加入前必须先将SRBC悬液充分混匀）。 6．此时第1~6管的血清稀释度为1 : 40，1 : 80，1 : 160，1 : 320，1 : 640，1 : 1280。摇匀后，置37℃温箱，次日观察结果并记录。 倍比稀释：Ag or Ab？ [结果] 1．观察前切忽摇动试管，以免凝集分散。 2．先观察对照管，该管应无凝集现象，血球沉于管底呈圆点状，如出现凝集则说明操作有错误或非特异凝集，试验结果不能成立。 3．再观察1~6试管，并以 ???? 、 ??? 、 ?? 、＋、—分别表示凝集强度。 结果判断 ????：血球完全凝集，成厚膜状铺于管底，边缘呈锯齿状。 ??? ：血球呈薄层贴于管底，边缘不整齐。 ??：血球在管底的中央呈小圆盘状，边缘凝集呈颗粒状。 ?：血球呈较大的圆盘状沉淀，边缘凝集颗粒很少。 －：无凝集，血球沉于管底呈圆点状，边缘整齐。 效价：生物制品活性（数量）高低的标志。以血清最高稀释度仍能出现“?? ”凝集现象者，作为该血清的效价（滴度）。 1 2 3 4 5 6 7 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 对照 1 ++++ +++ ++ ++ - - - 2 ++++ +++ +++ +++ ++ ++ - 3 ++++ +++ +++ - - - - 4 ++ +++ ++++ +++ ++ - - 抗体过剩 抗体抗体比例合适 抗原过剩 网格学说（lattice theory） 补体结合试验（4人一组） 是指在补体的参与下，以绵羊红细胞（SRBC）和溶血素（抗SRBC的抗体）作为指示系统的抗原抗体反应。本实验操作繁琐，但补体结合抗体出现早、消退快，有助于早期诊断。 补体结合试验 抗原-抗体 ＋ 补体 ＋ 绵羊红细胞-溶血素 溶血 不溶血 抗原与抗体对应 抗原与抗体不对应 （待检系统） 已知Ag或Ab 待检Ab或Ag （指示系统） 仅供1组Ag-Ab系统反应的定量补体，不能过多或过少。 [步骤与方法] 试验管 血清对照 抗原对照 补体对照 溶血素对照 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 — 0.2 0.2 0.4 0.6 0.2 0.2 0.2 0.2 — 0.2 — 0.2 — — 0.2 0.2 — — — 1 2 3 4 5 结果 摇匀后37℃水溶20分钟