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* * 实验七 主要内容 1. 血浆凝固酶试验(1) 2. 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定(1) 3. 肥达氏反应(1) 血浆凝固酶试验 血浆凝固酶是一种能使用枸橼酸钠或肝素抗凝的人或兔血浆发生凝固的酶类物质。致病性葡萄球菌多数能产生,非致病株一般不产生,故血浆凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。 血浆凝固酶试验(4人一组) 血浆凝固酶有二种,一种是分泌至菌体外的,称为游离型血浆凝固酶;另一种血浆凝固酶结合于菌体表面并不释放,称为结合型血浆凝固酶或凝聚因子。游离型血浆凝固酶采用试管法检测,结合型血浆凝固酶则以玻片法测试。 [步骤与方法] 试管法: 1.取洁净小试管二支,吸取1 : 4稀释的兔血浆各0.5ml于二试管内。 2.用接种环取金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌菌苔,分别混悬于血浆中,制成浓厚悬液。 [步骤与方法] 试管法: 3.将试管置37℃水浴中,每半小时取出观察一次,4小时内判断结果。观察时将试管微微倾斜,凡血浆呈胶冻状者为阳性,仍呈液体者为阴性。 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定 标本 选择鉴别培养基 (伊红美蓝培养基) 生化反应 血清学鉴定 双糖铁培养基 已知Ab检测未知Ag (玻片凝集试验) 五糖发酵 H2S试验 吲哚试验 [步骤与方法] 1.用分段划线法将混合菌液接种于伊红美蓝培养基(Eosin Methyl Blue, EMB平板) 上,置37℃培养18~24小时。 粪便中肠道致病菌的分离与鉴定(1) 肥达氏反应(4人一组) 人体感染沙门氏菌1~2周后,血清中出现能与其发生特异性凝集的抗体。肥达氏反应是用已知伤寒杆菌O、H抗原及甲、乙型副伤寒杆菌H抗原与待测血清做定量试管凝集试验,以测定血清中有无相应抗体,根据抗体含量的多少及增长情况,辅助诊断肠热症。 *
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