医学微生物学精品课件：微生物实验2.pptVIP

* * 实验二 主要内容 （一） 细菌培养基的制备与灭菌 （二） 悬滴法观察细菌动力 培养基的分类： 1. 按其营养组成和用途分类：基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基。 2. 按其物理状态分类：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。 培养基：是由人工配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 方法与步骤 配料 溶化 矫正PH 分装 高压灭菌 实验步骤（8人一组，每组200ml） 1．配料 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入装有蒸馏水的烧杯中，加热溶化。 称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 蒸馏水要少于所需量、牛肉膏很粘稠、蛋白胨很易吸潮、节约使用称量纸。 加热时需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 2．矫正pH 待培养基冷至40~50℃时，用滴管向培养基中逐滴加入2N NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6（4~5滴/100ml）。 注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。 3. 将称好的琼脂粉放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂，同时要注意防止瀑溢。 最后补足所失的水分。 注意用电安全，防止瀑溢！ 4．分装 中试管装量不超过管高的1/4（约5ml），灭菌后制成斜面。 余下装三角烧瓶，其量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 5．加塞、包扎： 培养基分装完毕后，在试管口、三角烧瓶口上塞上塞子，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并用记号笔注明姓名。 在三角烧瓶的塞子外、约20支试管的塞子外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿塞子，其外再用一道线绳扎好。 6．高压蒸汽灭菌： 将上述培养基放入高压蒸汽灭菌器， 121.3℃，15~20分钟高压蒸汽灭菌。 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅时，但锅内的温度还只有100 ℃ ，结果往往造成灭菌不彻底。 压力未降至 0 磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，甚至冲出管外。 7．搁置斜面 将灭菌的试管培养基塞子端搁在木棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 8.倾注平皿 待三角烧瓶中培养基冷至50~60℃时以无菌技术倾注平皿，每个平皿铺平即可（约15ml），冷凝后翻转于底部写上姓名，放入冰箱。 注意无菌操作、冷凝后再翻转！ 倾注于平皿底部 注意无菌操作！ 悬滴法属于不染色标本检查法中的一种，可以用来检测细菌的动力。 活菌未染色时呈无色半透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同进行观察。有鞭毛的细菌在镜下呈活泼有方向的运动，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。 悬滴法观察细菌的动力 *