医学微生物学精品课件：微生物.docVIP

实验一：细胞标本的观察与制作 革兰染色法是1884年由丹麦病理学家Gram创立的, 基本步骤是： 1. 初染：结晶紫染色 2. 媒染：碘液媒染 3. 脱色：乙醇脱色 4. 复染：稀释石炭酸复红复染 原理： 通透性学说：G+菌细胞壁因肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入脱色。相反G-菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使细胞壁通透性升高。 酒精脱色要掌握好时间，如果脱色不够，则 G-会变成G+，而脱色过度，G+会变成G- 。 链球菌 变形杆菌（鞭毛片）破伤风杆菌（芽胞片） 枯草杆菌：颤动————无鞭毛 大肠杆菌：迅速运动——有鞭毛 实验三、细菌的人工培养与理化因素对细菌的影响和环境中细菌检查 细菌的生长条件包括：①营养；②适宜温度；③一定的酸碱度；④适当的气体环境；⑤渗透压 分离培养接种法---平板划线法： 平板划线法可使混杂的细菌在琼脂平板表面分散生长，各自形成不同的菌落，再根据菌落的形态特征，挑选单个菌落继续培养，以此分离获得纯种细菌，用于进一步研究、鉴定或保存。 平板划线的方法根据待检标本中细菌的数量来选择，可分为分段划线法和连续划线法两大类。 纯种细菌接种法可分为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种 青霉素：耐药 链霉素与氨霉素：中毒敏感 庆大霉素：敏感 正常人体咽喉部的一种菌落周围有草绿色的不完全溶血环，为甲型溶血性链球菌。 实验四、溶菌酶试验与中性粒细胞的吞噬作用 溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种碱性蛋白，它能水解G+菌细胞壁中的肽聚糖成分而导致细菌溶解，它是一种体液杀菌成分。 G-细胞壁表面有脂多糖与脂蛋白，对其不敏感，但在特异抗体下脂多糖与脂蛋白被破坏后，溶菌酶可发生溶菌作用。 中性粒细胞具有对异物吞噬、杀伤和消化的功能，是机体防御的重要组成部分。 巨噬细胞是固定于组织中的大吞噬细胞，对异物吞噬和消化的功能，是机体非特异性免疫的重要机制之一。 中性粒细胞的吞噬作用： 血液中的小吞噬细胞即中性粒细胞，具有很强的变形运动能力，是机体发生急性炎症时的主要反应细胞。具有对异物吞噬、杀死和消化的功能，是机体防御功能的重要组成部分。检查其吞噬细菌的能力，有助于判断人体的免疫功能。 步骤： 给小白鼠腹腔内注射白色葡萄球菌菌液1ml，放入笼中，让小鼠活动。 分别于40分钟、60分钟后，抽取腹腔液涂片、干燥。最后将小白鼠拉脱颈椎处死。 瑞氏染色：干燥后的标本片 → 瑞氏染液数滴（计数滴数）1 min → 加等量PBS继续染5min → 水洗 → 干燥 → 油镜观察 体外法： 巨噬细胞的吞噬作用 巨噬细胞是固定于组织中的大吞噬细胞。具有对异物吞噬和消化的功能，是机体非特异性免疫中重要机制之一。将鸡红细胞注入小白鼠腹腔内，可检测出腹腔内的巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力。 实验五、凝集反应、补体结合实验与血清总补体测定法 凝集反应：颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。但补体结合抗体出现早、消退快，有助于早期诊断。 直接凝集反应：玻片法、试管法。 试管凝集反应为一种定性、半定量试验，用已知的颗粒性抗原检测血清中未知抗体及相对含量。 利用生理盐水将待检血清在试管中进行连续倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，经过一定时间后，观察有无凝集并根据凝集程度判定血清中抗体的效价。 实验注意事项： 1．观察前切忽摇动试管，以免凝集分散。 2．先观察对照管，该管应无凝集现象，血球沉于管底呈圆点状。 效价：生物制品活性（数量）高低的标志。以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集现象者，作为该血清的效价（滴度）。 补体结合试验： 是指在补体的参与下，以绵羊红细胞（SRBC）和溶血素（抗SRBC的抗体）作为指示系统的抗原抗体反应。本实验操作繁琐，但补体结合抗体出现早、消退快，有助于早期诊断。 结果：管内液体混浊呈浅红色为不溶血，管内液体透明呈红色为溶血。 血清总补体测定（50％溶血法 ）：SRBC （抗原），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC溶血。当SRBC与溶血素浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性呈正比例关系。因此，将新鲜待检血清做不同稀释后，与SRBC与溶血素反应，测定溶血程度，可测知补体总溶血活性。 由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故取50%溶血为终点观察指标，以精确