医学微生物学精品课件：微生实验1.pptVIP

* * 实验一 主要内容 （一） 实验室规则 （二） 实验报告的书写 （三） 显微镜油镜的使用和保护 （四） 细菌涂片标本的制作及革兰染色法 （五） 细菌的基本形态及特殊结构示教 实验室规则 1.进入实验室必须穿白大衣，非必要的衣物、书籍不准带入实验室。 2.实验室内禁止吸烟、吃食物，不准高声谈笑和随便走动。 3.如遇培养物或检验材料破损，污染桌面、地面、书籍、衣服等，应立即用2%来苏或5%石炭酸处理半小时以上，再洗净。若发生割破手指等事故，应立即报告指导教师进行处理。 实验室规则 4.吸过菌液的吸管、毛细滴管及用过的玻片要投入消毒缸内，不得放在桌面上，也不得在水池中冲洗。 5.爱护仪器，节约实验材料。器材如有破损，应报告指导教师，进行登记、处理。 6.实验完毕，须将培养物放入温箱，整理桌面，打扫实验室，关好门、窗、水、电、洗手后方可离开实验室。 实验报告的书写 1. 要求项目：题目、目的、材料与方法、结果、分析与讨论。 2. 必须使用统一的实验报告纸。 3. 课后独立完成实验报告。 普通光学显微镜的构造 包括光学和机械两部分 1. 光学部分由目镜、物镜、聚光镜、反光镜、光圈组成。 光学部分—放大系统 目镜(接目镜) 物镜(接物镜) “10×”的含义，目镜指针。 低倍镜 10× 高倍镜 40× 油 镜 100× 如何计算显微镜的放大倍数？ 光学部分—照明系统 光 源 反光镜 聚光镜 光 圈 ：内光源与外光源 ：凹面镜与平面镜 ：升高与降低聚光镜 ：放开与关闭光圈 如何调节观察 视野的明暗度？ 机械部分 镜座 镜臂 镜筒 物镜转移器 载物台 玻片标本推进器（推片器） 粗细调节器 显微镜油镜的使用原理 使用油镜时需加香柏油，因为在油镜与载玻片之间加入与玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则可避免光线的损失，增加了视野亮度，从而提高了显微镜的分辨本领。 显微镜油镜的使用步骤 1．先用低倍镜选好视野，尽量升高集光器和放大光圈，然后换上油镜头。 2．加一滴香柏油于标本片的欲检部位。 3．从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜头浸在香柏油中，且几乎与标本相接触，应特别注意不能压在标本上，更不能用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。 4．从接目镜中观察并同时徐徐转动粗调缓慢上升镜筒，直至出现模糊物像时为止，然后用细调节器校正焦距，使物像清晰。 1．用毕油镜，上旋镜筒，取出标本片之后，即以擦镜纸沾少许擦镜液拭净，再用干的擦镜纸拭去擦镜液，否则用以粘固透镜的胶质能被擦镜液溶解，日久镜片将移位或脱落。 2．搬动显微镜时避免碰撞。不用时，应将罩子套好，对号放入柜中。 请确保油镜头擦拭干净！ 油镜的保护 葡萄球菌（G+） 大肠杆菌（G-） 【练习使用】 革兰染色法 细菌除了体积小，而且是无色透明或半透明的。要观察它们形态以及特殊结构，除了借助于显微镜以外，常常还需借助染色法，染色法是使细菌着色，与背景形成鲜明的对比，这样易于在显微镜下进行观察。 细菌染色法有多种，有简单染色法（单染）；复杂染色法（复染）。复杂染色法包括分类鉴别染色法，如革兰染色法、抗酸染色法；特殊染色法，如荚膜、芽胞、鞭毛、细胞壁、核质等染色法。 革兰染色法是1884年由丹麦病理学家Gram创立的，这种染色法可将所有的细菌分为两大类，是细菌学中使用最为广泛的一种染色法。 基本步骤是： 1. 初染：结晶紫染色 2. 媒染：碘液媒染 3. 脱色：乙醇脱色 4. 复染：稀释石炭酸复红复染 1. 等电点学说：G+菌ph2~3，低于G-菌ph4~5。 2. 化学学说：G+菌含大量核糖核酸镁盐。 3. 通透性学说：G+菌细胞壁因肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入脱色。相反G-菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使细胞壁通透性升高。 原理 结晶紫1min 卢戈碘 1min 95%乙 醇30s 稀释复红 1min 革兰染色法 方法与步骤 涂片 干燥 固定 染色 干燥 镜检 涂片制备 涂片：取生理盐水滴于玻片二端，用无菌操作取少量细菌培养物放入盐水滴内研匀，