烫伤对大鼠结肠平滑肌细胞骨架影响实验得研究.pdfVIP

inasense．3．Themethodfor cellularultrastructurewiththe presumed study flow associatedwiththeelectron is and cytometry microscopesimple，stable effective． Words：Scald／Intestine／Smooth Key Muscle／Cytoskeleton／Actin 6 刖 磊 肠道细菌或毒素移位是烧伤患者发生全身感染的一个重要途径，是严 重烧伤常见的合并症，也是引起烧伤后多器官功能衰竭的重要原因之一。 因此，进一步研究肠道细菌移位的发生机制，有利于预防、控制肠道细菌 移位的发生，对于严重烧伤的治疗至关重要。 目前普遍认为烧伤后肠道细菌移位的出现与肠机械、生物学和免疫学 三大屏障受损有关。Fang等Ⅲ认为肠粘膜屏障功能损害是肠道细菌移位发 生的关键；马利等瞳1的研究也表明，烧伤后毒素对肠粘膜物理性屏障的破 坏致肠粘膜的通透性提高是肠道细菌移位发生的一个重要原因；Steffen 等口3证实了肠道内细菌生态平衡的破坏能促使细菌移位到肠外组织；还有 研究结果显示机体受创后T细胞数可持续下降，致5天左右方可恢复正常， 而创伤休克后Th／Ts比值的下降反映了细胞免疫功能的抑制，提示有继发 感染的可能，T细胞功能在创伤休克后也明显降低，巨噬细胞此时也主要 表现为对免疫功能的抑制作用。 肠道的运动是其诸多生理功能的基础之一，而肠道平滑肌细胞是肠道 动力的物质基础和源泉，对平滑肌细胞起支架作用的细胞骨架在维持肠道 平滑肌细胞正常结构和功能中起着关键的作用，细胞骨架的改变将直接影 响到肠道的运动及其他机能。我们根据长期的临床实践和前期研究结果推 测，烧伤后胃肠动力障碍有可能是导致细菌移位的机制之一，因此本研究 我们重点观察探讨肠道平滑肌细胞骨架在烧伤后是否会发生变化及其程 度，以印证我们的推论。 细胞骨架以不同的形式广泛分布于机体细胞内，构成细胞的支持结构 和胞质其它成分的依附支架，以此维持细胞的特定形状和细胞内多种成分 的空间位置。近年来的研究表明，细胞骨架还参与细胞之间的能量及信息 传递、各种运动、基因表达，并且在细胞分裂分化中起着必不可少的重要 作用。越来越多的研究发现细胞骨架表达异常与许多疾病和损伤有关。可 见，细胞骨架的结构改变将导致细胞结构和功能的改变。 到目前为止对烧伤后肠道细菌移位的研究主要集中在对肠道黏膜等方 面，而对于肠道平滑肌方面的研究甚是少见，至于烧伤后肠道平滑肌细胞 骨架改变的研究，我们尚未见到相关报道。 本课题主要从平滑肌细胞骨架的主要组成成分之一微丝着手，研究、 探讨烧伤后肠道平滑肌细胞的细胞骨架改变，从而进一步为假说“肠道平 滑肌细胞的损伤也是烧伤后肠道细菌移位的重要途径和环节”提供理论依 据和实验支持。 材料和方法 1 实验材料与仪器 1．1实验动物 合格证编号：(医动)。 1．2主要试剂 胶原酶II(collagenaseII)：美国Sigma公司生产。 胰蛋白酶抑制剂，牛血清白蛋白：购自深圳晶美公司。 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗大鼠肠道平滑肌微丝肌动蛋白抗体 (Actin一8C一7210FITC)：美国SantaCruz公司生产。 i．3主要仪器设备 流式细胞仪(Beckman XL)。 coulter．EpiCS 电子显微镜(Tecnaii0，Philips公司)。 倒置相差显微镜(OlympusAX一70，Japan)。 超净工作台(TDGC2J一I／0．5型，苏州净化设备厂)。 电热恒温水温箱(HH．WZI．CU600型，上海医疗器械七厂)。 数码照相机(Sony)。 磁力搅拌器。 冰箱。 一30℃低温冰箱(Sanyo)。 电子天平。 CH一