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丹参糖蛋白组分自由基清除活性探究摘要：目的测定丹参糖蛋白4种浓度的乙醇分级沉淀物对自由基的清除作用。方法用可见分光光度法测定。结果丹参糖蛋白的4种乙醇分级沉淀物对DPPH，OH，O2－15.3％～86.9％，且量效关系明显。结论丹参糖蛋白是一种良好的自由基清除剂。 关键词：丹参；糖蛋白；分级沉淀；自由基清除剂 中图分类号：R972文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)08-0011-03 植物糖蛋白是继多糖之后食品功能性成分开发和研究的热点，这类成分的一些特性有益于人体健康，在生化、医药、食品等领域具有多方面的用途。丹参是我国常用中药，味苦，性微寒，具有活血去瘀、通经止痛、清热安神之功效，可用于治疗冠心病、中风、微循环障碍等疾病[1]。现代药理研究证明，丹参中脂溶性有效成分为丹参酮类，有抗菌作用[2]；水溶性有效成分为酚酸类，有改善记忆，降低抗癌药阿霉素毒性等作用[3]。目前对丹参的研究仅限于以上所述小分子活性物质，国内外对于丹参多糖及其复合物的研究尚未见报道。本研究以丹参糖蛋白粗品为原料，用乙醇分级沉淀得到不同的糖蛋白组分，测定各组分对1-1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH）、羟自由基（OH）和超氧阴离子自由基（O2－ 1材料与方法 1.1材料 1.1.1原料丹参糖蛋白粗品，本课题组从中药丹参中分离得到。 1.1.2仪器UNIC2000型紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）；SHB-III型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；HHW-21CU-600型电热恒温水槽、DGX-9073B-1型电热鼓风干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）；电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）。 1.1.3试剂无水乙醇，过氧化氢，硫酸亚铁，水杨酸，磷酸二氢钾，磷酸二氢钠，1-1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH，C18H12N5O6），均为分析纯；还原型辅酶I-吩嗪硫酸甲酯-氮蓝四唑（NADH-PMS-NBT）。 1.2方法 1.2.1丹参糖蛋白粗品的乙醇分级沉淀称取一定量丹参糖蛋白粗品，加水充分溶解得糖蛋白溶液。向此溶液加入无水乙醇搅拌至醇浓度为20%，密封置冰箱15 h；3 000 r/min离心45 min，得沉淀组分a，真空干燥，称重；向上步离心得到的上清液加入无水乙醇至醇浓度为40 %，离心得2次沉淀物b，干燥称重；再向第2次离心后的上清液加入无水乙醇至醇浓度为60 %，离心得3次沉淀物c，干燥，称重；变乙醇浓度为80%，离心分离得4次沉淀物d，干燥，称重。 1.2.2丹参糖蛋白的不同组分对DPPH的清除作用[4]将丹参糖蛋白的不同组分分别配制成500，700，900，1 100μg/mL 的水溶液；以无水乙醇为溶剂配制0.177 7 mmol/L的DPPH溶液。依次向10 mL比色管加入4 mL pH 6.88的磷酸盐缓冲溶液，4 mL DPPH溶液，混匀，再加入1 mL丹参糖蛋白溶液，蒸馏水补至刻度，充分混匀，10 min后在520 nm处测定吸光度。按下式计算DPPH的清除率： A0：不加样品液DPPH溶液的吸光度；As：加入样品溶液反应后DPPH溶液的吸光度；AX：不加DPPH溶液加样品的吸光度 1.2.3丹参糖蛋白不同组分对OH自由基的清除作用[5]不同组分的丹参糖蛋白配制成50，100，200μg/mL的水溶液。依次向10 mL 试管加入6 mmol/L的FeSO4 溶液 2 mL ，丹参糖蛋白水溶液2 mL，6 mmol/L H2O2溶液2 mL，摇匀，静置10 min。再加入6 mmol/L的水杨酸溶液2 mL，摇匀，静置30 min后于510 nm处测定吸光度。按下式计算OH的清除率： A0：不加样品液溶液的吸光度；As：加入样品溶液反应后的OH吸光度；AX：不加水杨酸溶液时丹参糖蛋白的吸光度 1.2.4丹参糖蛋白不同组分对O2的清除作用[6] 不同组分的丹参糖蛋白配制成50，100，200，400μg/mL的水溶液；O2－NADH-PMS-NBT系统（16 mmol/L，pH 8.0的Tris-HCl缓冲液，内含NADH 73 mmol/L，PMS 15 mmol/L，NBT 50 mmol/L）产生。依次向10 mL 的试管加入丹参糖蛋白溶液1 mL，再加NADH-PMS-NBT系统（空白管不加PMS，对照管不加丹参糖蛋白溶液），总体积为3 mL，静置10 min测吸光度。按下式计算 O2的清除率： A0：不加样品液溶液的吸光度（对照管）；As：加入样品溶液反应后O2－AX：不加PMS溶液时丹参糖蛋白的吸光度（空白管）。 2结果与分析 2.1丹参糖蛋白的不同组分清除DP