质谱在肽与蛋白分析中的应用.pdfVIP

( ) 3·16 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2000 ,35 4 ∶316～320 质谱在肽和蛋白分析中的应用 罗国安 , 王义明 , 朱　瑛 (清华大学化学系 ,北京 100084) 　　质谱已成为肽和蛋白分析的重要工具 ,主要归 待测物释放到气相中。基体在待测物离子化过程中 ( ) 功于一些软电离技术的应用 ,如电喷雾 ESI 和基 还起着质子化或去质子化试剂的作用。基体引进激 ( ) 体辅助激光解吸电离 MALDI 。生物大分子多为 光解吸技术前 ,只有低分子量化合物能被完整引入 极性、难挥发化合物 ,不易气化 ,用传统质谱无法测 气相 ;对于高分子量化合物 , 则无法解决其气化问 定。但随着新的离子化技术的广泛应用 ,现已能高 题。基体的加入使除待测物 —基体外的分子间相互 效地电离一些完整或片断的大分子生物聚合物 ,从 作用减少 , 降低了解吸能 ,解决了大分子的气化问 而进行质谱测定。本文对质谱在肽和蛋白分析的几 题。MALDI 可允许使用一般生物缓冲液。MALDI 个领域中的应用进展进行评述。 主要生成带单电荷离子 ,这样质谱图中的离子与混 1 　软电离技术 合物中肽和蛋白基本存在对应关系。 1. 1 　电喷雾电离( ESI) [1 ] 　电喷雾电离利用位于 2 　肽和蛋白分析中的应用 一根毛细管和质谱仪进口间的电势差生成离子 ,在 2. 1 　测序 　在鉴定新的肽和蛋白、合成产物及从蛋 电场的作用下产生以喷雾形式存在的带电液滴, 当 白质水解液中分离出的肽时,氨基酸序列的信息非 使用干燥气或加热时 ,溶剂蒸发 ,液体体积缩小 ,最 常重要。质谱已成为对小量肽和蛋白进行测序的有 终生成去溶剂化离子。电喷雾电离的特征之一是可 效工具。Chait 等[3 ]建立了对肽链 N端进行测序的 生成高度带电的离子而不发生碎裂 ,这样可将质荷 ( ) 方法 ,称作蛋白梯形测序 protein laddersequencing 。 比降低到各种不同类型的质量分析仪都能检测的程 原理 : ①使用少量链终止剂 ,进行快速分步降解 ,在 度。通过检测带电状态 ,可计算离子的真实分子量。 人为控制下产生一系列肽段 ,其中每个肽段于下一 同时 ,解析分子离子的同位素峰也可确定带电数和 个之间只相差一个残基 ; ②用 MALDITOF ( 飞行 分子量 ,因同位素峰间的质荷比差与带电数相对应 ) 时间 MS 读出肽段信息。用此方法可在磷酸肽中 (如 ,2 + 离子碳同位素峰间质荷比差为 05) 。尽管 定位磷酸丝氨酸残基。研究 N端封闭的肽和蛋白 , ESI 容许使用少量缓冲液和盐 ,但这些物质可能与 必须了解其 C端序列的信息。物质 P 、胰高血糖素、 待测物形成加合物 ,导致产生难以指认的分子量或 血管紧张素、胰岛素 B 链和肌红蛋白的测序可用肽 抑制待测