大鼠闭塞性细支气管炎模型的建立.docVIP

精品论文 参考文献 大鼠闭塞性细支气管炎模型的建立 陈明端　林江波　康明强通讯作者　宋前程 　　福建医科大学附属协和医院胸外科　福建　福州　３５００００ 基金项目:福建省医学创新课题项目编号(２０１２－CX－１８) 　　【摘要】　目的　建立更简单有效、能模拟肺移植后闭塞性细支气管炎(OB)的大鼠模型.方法　使用２５０－３００g雄性Wistar大鼠和SD大鼠,通过原位气管移植建立实验组(Wistarrarr;SD)和对照组(SDrarr;SD),观察第７天、第３０天、第６０天移植气管的病理改变.结果　大鼠术后生存状态良好,实验组移植气管H－E 染色可见类似人类同种异体肺移植后OB的病理生理改变,而对照组移植气管H－E染色未见OB.结论　大鼠原位气管移植模型能模拟肺移植后闭塞性细支气管炎,可用于研究OB的病因、发生机制、治疗方法等. 【关键词】　大鼠;　原位气管移植;　闭塞性细支气管炎【中图分类号】R３１８ 【文献标识码】B 　　【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８６６－０１　　 　　肺移植是治疗终末期肺部疾病的有效治疗手段.近年来随着技术的进步,肺移植已经取得满意的近期疗效,但５年生存率仅５０％,１０年生存率＜２０％,是所有实质性器官移植中远期生存率最低的.临床和实验研究表明闭塞性细支气管炎(OB),即肺移植慢性排斥反应,限制了肺移植患者的长期生存.OB己经成为肺移植患者死亡的首要原因和进一步提高远期疗效的主要障碍[１].因此开展肺移植相关OB的研究是近年来肺移植研究领域的热点和重点.肺移植相关OB研究的一个重要障碍,就是缺乏有效模拟OB的动物模型.本实验通过建立大鼠原位气管移植模型,提供了一种研究肺移植相关OB 更为理想的实验模型. １　材料和方法 　　１．１　实验动物清洁级Wistar大鼠,雄性,２５０~３００g,１５只;清洁剂SD大鼠,雄性,２５０~３００g,４５只,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供【许可证号SCXK(沪)２０１２－０００２】.大鼠饲养于福建医科大学实验动物中心SPF级动物房. １．２　实验器械及药剂１０％水合氯醛(福建医科大学附属第一医院制剂)、７－０带针尼龙缝合线(宁波市成和纤维器械厂)、外科手术器械(苏州医疗器械厂). １．３　供体手术操作以Wistar大鼠和SD 大鼠为供体,术前禁食、禁饮８小时,以１０％水合氯醛(０．３ml/１００g)腹腔内注射麻醉动物.麻醉成功后,仰卧固定于手术操作台(图１),前颈部备皮,用２％碘伏消毒,纵行切开颈部及上胸部皮肤,分离气管周围肌肉、血管,暴露气管(图２),切取甲状软骨下第２环至隆突上第２环气管, 剥除气管外膜外粘连的其它组织,然后冲洗干净后浸泡于４℃生理盐水中备用.取用气管时剪取７个环气管段,修剪平整后,５个环为１段作为供体. 　　１．４　受体手术操作以SD大鼠为受体,麻醉、备皮、消毒同上法,纵行切开颈部皮肤,充分暴露颈段气管,以甲状软骨下第４、５环间为中心,向上、向下钝性分离气管外筋膜结缔组织,小心剥离并保护双侧喉返神经,避免刺破血管,充分暴露气管.离断甲状软骨下第３软骨环,切去５个气管环(图３),采用端端吻合术植入供体的５个气管环.先吻合尾侧吻合口,膜部对膜部,软骨部对软骨部,７－０带针尼龙缝合线间断缝合,共３针完成.同法缝合头侧吻合口(图４).逐层缝合切口(图５).手术过程中,大鼠存在自主呼吸,应注意观察其通气情况,及时清理气管内渗血及分泌物,保持管腔通常,必要时可机械通气辅助. 　　１．５　标本获取及检测指标１．５．１　移植后大鼠饲养于SPF级动物房内,观察大鼠的生存状态及存活率,包括活动情况,精神状态等,并于术后第７天、第３０天、第６０天,随机抽取５只受体取移植气管标本进行检测.１．５．２　移植气管固定于１０％福尔马林,然后石蜡包埋、切片,行H－E染色研究上皮破坏情况;气管腺的破坏情况;软骨环的破坏情况;间质组织破坏情况, 包括水肿、血肿和淋巴细胞、单核细胞的浸润,肉芽组织样反应、坏死等.１．５．３　计算移植气管通畅度　气管通畅度指移植气管最狭窄处的横断面面积CSA２,与环状软骨环下第２个气管环处横断面面积CSA１之比.横断面面积CSA＝(a/２)times;(b/２)times;pi;(其中a为横向直径,b为矢向直径,均在内置测微尺的光学显微镜下测算).气管通畅度(％)＝CSA２/CSA１times;１００％＝(a２times;b２)/(a１times;b１)times;１００％. 　　２　结果２．１　３０例大鼠气管原位移植模型,建模平均用时(３０plusmn;１０)min,术后大鼠精神良好,进食正常,活动后有轻－中度喘息音,无死亡案例. ２．２　对照组共１５例大鼠,移植气管标本镜下观察均未见上皮组织、气管腺破坏,软骨环完整;