大鼠急性心肌梗死后去甲肾上腺素转运蛋白及氧化应激变化的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 大鼠急性心肌梗死后去甲肾上腺素转运蛋白及氧化应激变化的实验研究 刘 青 　　（武警8630部队医院 天津 300000） 　　【摘 要】目的：建立大鼠心肌梗死的模型，观察心肌梗死后去甲肾上腺素转运蛋白（NET）的变化规律，以及与氧化应激的相关性，探讨NET对大鼠心室重塑和心功能的潜在影响及机制。方法：Wistar大鼠随机分为心肌梗塞组和假手术组：结扎大鼠冠状动脉前降支，形成急性心肌梗死模型。4周后，测定心脏心室重塑的各项指标、用免疫组织化学、EILSA技术检测去甲肾上腺素转运蛋白（NET）、检测2组大鼠心肌中总超氧化物歧化酶(SOD)、铜锌-超氧化物歧化酶(CuZn-SOD) 活性，血液过氧化氢(H2O2)水平，并与假手术组比较。结果：心肌梗死组（M组）大鼠心室重塑明显、左室重量指数 （LVWI）升高，心率增快，血流动力学紊乱。心肌中NET、SOD、CuZn-SOD下降，血液中H2O2表达升高(Plt;0.05)。NET的变化与氧化应激有一定相关性。结论：心肌梗死后出现去甲肾上腺素转运蛋白减少、交感异常、氧化应激异常激活，3者都可能参与与心室重塑、心功能变化，为探寻新的治疗靶点提供依据。 　　【关键词】去甲肾上腺素转运蛋白；心肌梗死；氧化应激；心室重塑 　　【中图分类号】R542.22 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）5-0113-02 　　各种原因导致冠状动脉痉挛或者堵塞、血流中断，持久而严重的心肌缺血导致部分心肌急性坏死即心肌梗塞，心肌梗死后交感神经兴奋，儿茶酚胺异常释放使心肌细胞线粒体损害，激活异常的氧化应激[1-3]。正常情况下去甲肾上腺素转运蛋白(NE transporter，NET)位于交感神经突触前膜，将90％以上交感神经冲动释放的NE通过再摄取(reuptake)回到神经末梢中，NET参与交感神经突触前、心肌间质中NE浓度的调节[4-6]。心肌梗塞后交感神经功能异常是导致病情恶化、后期心室重塑的重要原因之一，因此，笔者研究心肌梗塞后NET的变化，探讨NET在心肌梗塞后的病理生理作用，是否参与心肌梗塞后心脏功能的变化，为探寻新的机制和药物治疗靶点提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品及试剂 　　SOD 及CuZn- SOD 活性测定试剂盒、H2O2 测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。人去甲肾上腺素转运蛋白（NET）检测试剂盒购于上海信则生物科技有限公司。FA1104电子天平购于上海精密科学仪器公司。体重200-250克的Wistar大鼠（购于第三军医大学动物中心，雌雄不限）。 　　1.2 大鼠心肌梗塞动物模型的建立及分组 　　参照文献的方法[7]：麻醉大鼠后给予小动物呼吸机，开胸后结扎左冠状动脉前降支（选择左心耳下缘与肺动脉圆锥间距主动脉根部约3mm处为结扎点）。16只大鼠随机分为2组（n=8）分别为假手术组（S组），心肌梗死组（M组），大鼠模型建立4周后摘取大鼠心脏，分别送液氮保存，血液离心后取上清测定H2O2。 　　1.3 心脏重量指数测定 　　4周后处死大鼠后清洗心脏，吸干水分后沿室间沟切开左室（包括室间隔），左、右室分别测量，用FA1104电子天平测量各部分重量。测量方法为：右室心脏重量指数=右室心脏重量/体重、左室心脏重量指数=左室心脏重量/体重，按照公式分别计算出左右室心脏重量指数。 　　1.4 SOD 及CuZn- SOD活性、H2O2水平测定方法 　　按照试剂盒说明书，黄嘌呤氧化酶法测定心肌SOD 及CuZn- SOD活性，比色法测定血清H2O2 含量。 　　1.5 心肌NET免疫组织化学检测：左心室按照长轴采取组织标本、石蜡包埋、切片常规脱蜡至水。采用碱性磷酸酶标记的免疫组织化学间接法，按照试剂盒操作步骤，加兔抗大鼠NET多克隆抗体(1：200，ADI Inc．)，湿盒内4℃过夜，加碱性磷酸酶标记的羊抗兔IsG(1：200，Jackson)室温下孵育2 h。加入底物显色、伊红复染。每个标本按3个不同部位各取5张切片，在times;400视野下，每张切片随机拍摄5个视野，计数每个样本免疫反应阳性总数。 　　1.6血流动力学测定 　　麻醉大鼠后暴露颈部动脉后经左颈总动脉插管，连接MPA-2000生物信号分析系统压力换能器，用多导记录仪记录大鼠的心腔内血流动力学参数。 　　1.7病理形态学分析及心肌NET的ELISA检测 　　大鼠心肌研磨后置于玻璃匀浆器中，裂解离心后采用Bradford方法进行蛋白质定量。按照NET的ELISA检测试剂盒步骤检测在心肌内的水平。 　　1.8 统计学处理 　　计量数值采用均数plusmn;平均差（plusmn;s ）表示。采用SPSS13.0统计软件分析，两组间行t检验,多