异源反应性NK细胞受体和宿主MHCⅠ类分子匹配程度对aGVHD影响得研究.pdfVIP

异源反应性 NK 细胞受体与宿主 MHC Ⅰ类分子匹配程度对aGVHD 的影响研究 中文摘要 骨髓移植 （bone marrow transplantation ，BMT ）是治疗血液系统良恶性疾病 和某些实体瘤的有效手段，但移植后的移植物抗宿主病（graft-versus-host disease， GVHD ），尤其是急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease ，aGVHD ）， 在很大程度上限制了其在临床上的广泛开展。国内外学者都在积极探寻降低 aGVHD 的方法。有研究发现：在异基因造血干细胞移植中，供者来源的同种异 体反应性 自然杀伤细胞（allo-reactive natural killer cells ，allo-NK 细胞）可以清除 受者体内的白血病细胞，同时降低 aGVHD 的发生率和严重程度。由于NK 细胞 发挥生物学效应依赖于其受体与特异性配体的识别与匹配程度，因此推测 allo-NK 细胞对 aGVHD 的抑制作用可能与其受体与配体MHC Ⅰ类分子的匹配程 度有关。本研究初步探讨了 allo-NK 细胞受体与宿主 MHC I 类分子的匹配程度 对其抑制 aGVHD 的作用和机制，为进一步开展无关供者或半相合NK 细胞 （如 无偿献血者的 NK 细胞）治疗 aGVHD 的研究奠定了基础。 研究中首先观察了外源性骨髓细胞在主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex ，MHC ）全相合、半相合和全不相合受者小鼠内的分 布和迁移规律，基于此，建立了供/受者不同 MHC 分子相合程度的 aGVHD 小鼠 模型。实验思路简述如下：首先，分离萤火虫荧光素酶转基因小鼠 C57BL/6J 的 骨髓细胞，通过尾静脉输注给经过γ射线辐照的 C57BL/6J （全相合）、CB6F1 （半 相合）和 BALB/c （全不相合）小鼠，在不同时间点，通过活体成像技术观察荧 光素酶标记的骨髓细胞在受者体内的分布规律。结果表明：外源性骨髓细胞在三 类受者体内的时空分布规律均呈下列特点:外源性骨髓细胞首先迁移到肺脏，然 后依次向肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结迁移，最终定居于骨髓后重建造血，但在细 胞分布与迁移的数量和速度上表现出明显的不同。输后 1h 外源性骨髓细胞主要 分布在肺脏，BALB/c 小鼠肺脏中的骨髓细胞多于 CB6F1 和 C57BL/6J 小鼠；输 后 4h ，肝脏和脾脏中开始出现外源性骨髓细胞并逐渐增多， BALB/c 小鼠脾脏 3 中的骨髓细胞增长最快；输后 24h ，外源性骨髓细胞主要集中在肠系膜，BALB/c 小鼠肠系膜中的外源性细胞数量要多于CB6F1 小鼠，后者又多于C57BL/6J 小鼠。 以上结果说明，供者细胞与受者 MHC 分子不相合程度影响着骨髓细胞迁移到肺 脏、肝脏、脾脏和肠系膜淋巴系统的时间、速度，并决定着在这些脏器中驻留的 数量和时程。 为了研究 allo-NK 细胞与受者 MHC 分子匹配程度对 aGVHD 的影响，首先要建 立合适的不同 MHC 相合程度的 aGVHD 动物模型。传统移植理论认为预处理的 γ射 线强度是影响 BMT 后植入和 aGVHD 的主要因素，本研究中分别设立 8Gy、6Gy 和 4Gy 辐照剂量组，观察、评价单纯辐照和辐照后骨髓移植小鼠的生存期、造血恢 复情况和嵌合状态。实验中将辐照的 CB6F1 和 BALB/c 小鼠作为受者，单纯辐照 组小鼠只辐照不移植骨髓细胞，移植组小鼠辐照后输入 C57BL/6J 小鼠的骨髓细 胞。结果发现：8Gy 单纯辐照组和移植组小鼠外周血中白细胞和血小板在+1d 开 始显著下降，+7d 时降低到最低值后缓慢回升，小鼠均在+15～+21d 内死亡，濒 死时嵌合率大于 90%；6Gy 移植组小鼠在+7d 时，白细胞和血小板降低到最低值， 随后逐渐恢复，+2w 时嵌合率为 50%～75%，存活期超过 3 个月；4Gy 单纯辐照组 和移植组小鼠外周血中白细胞和血小板下降幅度小于 8Gy 和 6Gy 组，在+7d 开始 逐渐恢复，+2W 时移植组的嵌合率仅 21%～41%。综合分析生存期、造血功能恢复 和嵌合率的结果，选择 6Gy 作为建立 aGVHD 模型的预处理剂量