高效液相色谱测定饮料中的咖啡因.pdfVIP

2008年5月 南京 晓庄学 院学报 May．2008 第3期 JOURNAL OF NANJING XIA0ZHUANG UNIVERSITY No．3 高效液相色谱测定饮料中的咖啡因 刘少贤，王小峰，龙 琪 (南京晓庄学院化学系，江苏南京210017) 摘 要：精确测定咖啡因在饮料中的含量，建立测定饮料中咖啡因含量的HPLC法的最佳工作 条件．色谱柱为Hypersil ODS柱：150 mm×4．6 mm(5 I．zm)，检测波长为270 nm；流动相A为去离子 水，B为甲醇，A：B=50：50；流速1 ml／min；进样量10 ，柱温为20cc．该方法准确、简便、快速，适 合可乐型饮料中咖啡因的测定．通过优化了的色谱条件，提高了测定的精密度及线性范围． 关键词：咖啡因；高效液相色谱法；精密度；线性范围 中图分类号：0657，7 文献标识码：A 文章编号：1009—7902(2008)03—0122—03 0 引言 咖啡因，又名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1，3，7一三甲基黄嘌呤，溶于水、醇、氯仿、二氯甲 烷等溶剂．它具有提神醒脑等刺激中枢神经作用，但易上瘾…．它主要由咖啡中提炼而得，纯的咖啡因呈白 色粉末状或是有光泽的针状结晶，熔点238℃，一大气压下于178℃升华，易溶于热水，等水溶液变冷后可析 出其水化物结晶体，无臭，味道微苦． 到目前为止，我国仅允许咖啡因加入到可乐型饮料中，一些人体和动物实验认为咖啡因是一种较弱的致 突变和致畸物，会引起局部缺血性心脏病，心律不齐 J．我国食品添加剂使用卫生标准GB2760-86规定，在 可乐型饮料中加入咖啡因，限量为150 mg／kg；美国、加拿大、日本、阿根廷、菲律宾为200 mg／L．咖啡因的含 量是饮料和茶叶中的一个重要品质指标，其含量测定一直受到分析工作者的关注 J．目前测定咖啡因的方 法很多，如薄层色谱法，紫外分光光度法和高效液相色谱法．前两种方法样品预处理过程比较复杂；HPLC法 灵敏、快速、准确，样品预处理较简单，已广泛应用于咖啡因和食品添加剂的测定．文献中一般采用乙腈，甲醇 和水做流动相．考虑到乙腈毒性较大．我们对色谱条件进行了优化设计，采用甲醇和水做流动相．其次，现行 国标方法上对咖啡因的样品预处理的方法比较复杂，通过反复摸索实践，对其进行了改进．在此基础上建立 了反相HPLC法测定饮料中的咖啡因，并对检出限、标准曲线、方法的精密度作了验证．结果表明：该方法简 便，含量测定准确，高效． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 HP 1100高效液相色谱工作站，配有手动进样器、在线脱气装置，二极管阵列检测器及色谱工作站， KQ2250B型超声波清洗器． 甲醇(色谱纯，美国Fisher公司)，水为去离子水，咖啡因标准品(英国Alfa公司)，可乐型饮料为市售(河 南省沃尔马饮料有限公司)．以上试剂均需经0．45 m滤膜过滤后使用． 1．2 实验方法 1．2．1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS柱：150 mm×4．6 mm(5 I．zm)；检测波长270 nm；流动相A为 收稿日期：2007—12—20 作者简介：刘少贤，男，南京晓庄学院化学系教师，主要从事有机化学、分析化学教学与科研 ．．． — — 122—— 去离子水，B为甲醇，A：B=50：50；流速1 ml／min；进样量10 1，柱温为20℃． 1．2．2 溶液的制备 a供试品溶液的制备 量取咖啡型饮料适量，在40℃超声脱气，试样5ml经稀释定容至50 IIl1 b对照品溶液的制备 精密称取咖啡因对照品适量，溶解成一定的浓度作为对照品溶液． 2 结果与讨论 2．1 色谱条件优化 应用二极管阵列检测器对所测物质进行光谱扫描，发现被测 物质在271、269 am处有两个依次降低的吸收峰，因此确定检测波 长为270 am．采用有机相(