pcr和核酸探检测猪源沙门氏菌四环素耐药基因tetc的研究.pdf

接 要 本研究应用平板稀释法对规模化猪场分离的16株猪源致病性沙门氏菌进行药敏试 验，测定了它粥对霞环素类抗藏素(圈环素、±霉素、金霉素)静最低撵蓠浓度(疆C)， 明，16株致病性沙门氏菌对四环素类抗菌素产生了普遍耐受憔，耐药率达100％，其中 低耐药菌株3株，低褥|药率18．75％。且沙门氏菌对四环素类抗菌素存在交叉耐药性， 帮一照沙门氏蘧越疆塔素类枣戆一静撬生素产生嚣药性，慰将黠司类其它晶耱抗生素媳 产生耐药性。 术对16株猪源致病性沙门氏黼的四环索耐药藻因tetC进行了扩增，结果在以染色体为 模板的扩增体系中，采觅有特弹性产秘；在戬质粒为横板的扩增体系中，12株菌株获得 特异性扩增产物，扩增产物大小约400bp，与菰敏试验的阻投符合率达75％，具有较岗 的检出率，表明猪沙门氏菌四环素耐药基因tetC只存在于质粒上。对tetC罱m清型、 MIC馕、遮骥来源之蠲豹关系分撰表甓tetC黥有无冬巍涛型、MIC壤、缝瑗来源无翳 三者乏褥te慰筋核蕾酸弱源率为97．7夸∽s。7％。 农国内首次采用光生物素对高耐药菌株(SLPSI．3)的PCR扩增产物进行标记，制 各核酸探针，用菌落琢位杂交对猪源致病性沙门氏菌的tetC蕊因进行了检测，并对杂交 条{孛遴行优化。结果袭明，13拣受试麓栋呈陬蛙，3株受试麓株呈弱性，与PCR捡测 结果阳性符合率达93．75％，其有较好的重复能，制备的tetC搛针具有较高的特异性和 灵敏凌。 本研究通过试验条件的筛选和优化，建变的猪源致病性沙门氏菌四环素耐药基因 tetC豹PCR霸核酸搽锋捡溅羧零，霹雳子蕊模亿猪场沙门氏麓霆环素耐药程漪分子滚 行病学监测。 关键词：沙门氏蓠西环索耐药蒸凿tetCPCR 核酸探赞 检测 本研究获。十五”鬻家科技玻关谋麓项黼赘助(谋麟编号：2002BASl4A-17-11)。 1 1前言 1．1文献综述 1．1．1沙门氏菌病概述 也是我国常见的细菌性疾病之一，临诊上多以败血症和肠炎为特征。自1885年Salmon 和Smith分离到猪霍乱沙门氏菌以来，对沙门氏菌病的研究历史已有百余年，迄今为止， 世界上已发现沙门氏菌有二千五百多种血清型，其中只有十个以内的罕见血清型属于邦 戈尔沙门氏菌，其余均属于肠道沙门氏菌，我国自70年代中期，开展了全国性的沙门 氏菌血清型调查，己发现有二百多种血清型【1】o猪沙门氏菌病又称猪副伤寒，常发于6 月龄以下的仔猪，以1~4月龄多发，临床上可分为急性(败血症)、亚急性和慢性三种 类型，本病常引起较高的死亡率，其中败血型病死率达90％，慢性型病死率达25％50％， 给养猪业造成巨大的经济损失。在临床中，除应用疫苗进行免疫预防外，主要应用抗菌 素给予防治，但由于猪致病性沙门氏菌血清型的多样性以及大量耐药菌株的存在和流 行，使得本病成了规模化猪场疫病防制中的一大难题，严重困扰着养殖业的健康发展。 因此，有效地进行本病的防治已成为规模化养猪生产中亟待解决的重要问题。 我国猪沙门氏菌感染率很高，且在屠宰中往往污染猪肉，引起人沙门氏菌感染，导 致人类疾病。国内外研究表明口一】，全世界人沙门氏菌感染有逐渐上升的趋势，在美国 (1998)，沙门氏菌感染在人感染性疾病中居前十位，在法国，沙门氏菌在食品污染中 尤为严重。据报道，由沙门氏菌引起的医院内感染和食物中毒不断增多，沙门氏菌成为 肠炎的最常见病原菌，感染菌型主要以肠炎沙门氏菌和伤寒沙门氏菌为主；沙门氏菌食 物中毒是所有食物中毒中最常见的一种，据统计约占细菌性食物中毒的42．6*／0--60％，在 食物中毒中占据首位或第二位，为此，WHO将沙门氏菌列入具有严重危害和中等危害 的食物传播性病原。研究还发现，随着人类沙门氏菌感染的不断增加，伤寒沙门氏菌已 成为世界性肠炎最流行的细菌之一，尤其是噬菌体型DTl04，通常表现出相同的耐药方 环素(T)耐药【4一】。正是因为沙门氏菌耐药菌株的不断增多，导致该病的发病率不断 上升、病情加重、死亡率增加。因此，控制沙门氏菌感染在兽医、食品卫生和公共卫生 等方面都具有重要的意义。 1．I．2耐药现状 2 建生产雯羧孛，黎麓获璧寨耱港沙门茂蘩漕絷。惑予魏生豢豹捷耀，龙萁蹩冀季食 淫傻掰(磐骶麓量拣黉挺生长熊黪长鬻菠照、蠢毽爝