prrsv非结蛋白nsp9和nsp10的原核表达及抗体检测elisa方法的建立.pdf

摘要 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine and reproductiverespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼 and syndromevirus，PRRSV)感染引起的一种以怀 吸综合征病毒(porcinereproductiverespiratory 孕母猪发生流产、早产和死胎等严重的繁殖障碍和仔猪与育肥猪的呼吸道症状为特征的传染病。 和Nspl0建立了检测PRRSV非结构蛋白抗体的间接ELISA方法。 mmoUL IPTG诱导后，重组蛋白Nsp9和 目的片段分别克隆到原核表达载体pET-28a(十)，经m1 别为27．3kD和31．5 别。 接ELISA方法，并确定了两种间接ELISA反应的最佳工作条件。结果表明，重组蛋白抗原的最 适包被浓度均为01Ixg／mL；待检血清的最适稀释度均为1：40；HRP-兔抗猪IgO的晟适工作浓度 30 均为1：800；待检血清和酶标二抗的反应条件均为37*(2rain；血清样本的阴阳性临界值分别为 间接ELISA方法对接种PRRSV灭活茸猪群仔培猪和PRRSV感染猪群的血清样本进行了分析， 结果表明建立的检测PRRSV非结构蛋白抗体的ELISA方法基本可以用丁I区分自然感染猪和灭活 疫苗免疫猪。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；非结构蛋白Nsp9；非结构蛋白Nspl0；原核表达；间接ELISA Abstract causative Porcine agentofPRRS，a respiratorysyndromevirus(PRRSV)isthe reproductiveand diseasecharacterized failurein withstillborn SOWS，includingearlyfarrowing piglets byreproductive all in abortions．aswellaS distressin andinfluenza-likedisease andlate-tarm respiratoryyoungpigs and ofPRRSVwas swine．Inthis nonstmctural successfully grow-finish study,the proteinNsp9Nspl0 the recombinant wereusedasthe to expressed．Andexpressed proteinNs#andNspl0 antigendevelop for PRRSV． indirectELISAsdetection ofantibodyagainst The and ofPRRSVwere PCRfrom and Nsp9NsplOgenes amplifiedby plasmidpSK—B2pGEM·C，and thencl