prrsv l毒株n基因克隆与原核表达的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 | (猪繁殖与呼吸缝盒征(PRRS)于20世纪Bo年代中期在世界上首次被发现，此病每年 给世界的养猪业造成的世界损失这几十亿美元，问接损失难以计算。我国于1996年首次 分离到PRRS病毒。最近几年，该病在我国的发病率呈明显上升趋势，给我国的养猪业仅 2000年直接损失达几十亿元人民币，间接损失难以估计，使我田的养猪业的遭受到极大的 打击，尤其，最近几年．有的现地反应．在应用PRRSV疫苗后，效果不理想，母猪和仔猪 仍有发病，提示我们，田内可能存在PRRSV的变异株或有PRRS欧洲型的存在，笨研莞以 期利用分子生物学方法获得一种￡蹬!鲨。鲢的检测抗原，为我国猪群PRRSV流行病学 调查及猪群检疫提供一种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂。 本研究根据GenB日．nk发表的PRRSV Lv毒株的基因序列，设计了一对扩增PRRSVLV毒 株N基因的一对引物，利用RT—PCR方法，从PRRSV LV毒株的细胞培养物中成功的扩增出 PRRSV LV毒株的N基因，该基因全长387碱基，与国际PRRSV欧洲型毒株的N蒸因序列的 同源率为100％：随后，将该基因与原校表达载体pGEX-6P一1连接，然后转化到宿主菌BL21 LV 中进行表达．结果证实；PRRSV N基因成功地进行了原核表达，表达的目的蛋白占菌体 总蛋白含量的20．8％．本实验的完成。为PRRS欧洲型的诊断抗原的制备及为我国猪群 PRRSV欧洲型流行病学调查及猪群检疫提供～种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂 奠定了基础。 L L，7 关键词：⑨N基因j原核表达7 OFNGENEFOM ANDEXPRESSION CLONING AND REPRODUCTIVE OFPORCINE STRAIN LELYSTAD VIRUS SYNDRoME RESPIRATORY ABSTRACT that still are these SOWS There fetus， delivery,dead many years aborted，premature reports as kindsof fetuswell andfinished weak and as piglet pigdevelopedmany pigletmummy thePRRS afterinoculatewithPRRSvaccine．It that diseases even