2005-206年鸡传染性支气管炎病毒中国分离株分子流行病学研究.pdfVIP

摘要 本研究从我国8个省市分离或收集到2005．2006年问的12株mv病毒，并对其生物学特性进行了研究，以说明 我国mv毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况及系统进化关系，同时阐明我国mv的基因型，探讨我 国m流行的背景和原因． 采取现地濒死病鸡病变组织处理后，经鸡胚屎囊腔接种9．11日龄sPF鸡胚，收集7孔尿囊液，同时观察胚体病 变，通过致sPF鸡胚病变特征、病毒对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征等方面的研究，结果发现， 鸡胚传毒传2．8代后，死亡鸡胚表现出生长发育障碍，胚体弥漫性出血，未死亡鸡胚呈现典型的卷曲胚；病毒尿囊液 不凝集鸡的外周血红细胞；在电镜下星球形，病毒囊膜表面有疏松排列的棒状纤突，具有冠状病毒粒子的形态特征， 未发现有其它病毒粒子的存在．所以可初步断定本研究所分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。 因，并将其进行了克隆、序列测定及分析，为了说明我国mv毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况， 同时构建了系统进化树，分析了我国Ⅲv分离株与参考毒株之问的系统进化关系． 通过s1基因系统进化树分析发现，本实验中所分离的8株mv毒株与分布于同一群内的我国分离毒株Lx4具 有较高的同源性(95．3-970％)，并且此群毒株间的s1基因推导氨基酸序列具有较高的同源性(91％)，亲缘关系 较近，而与我国目前用于m预防的主要活疫苗H120属于不同的基因型且氨基酸序列同源性较低(璺0．1％)，这可能 是导致m疫苗免疫失败或只能产生部分免疫保护作用，以致Ⅲ在鸡群中不断发生的主要原因之一‘还发现，毒株 a“=I王，LS【悯可能为一变异毒株．结合s1及N基因系统进化树分析可知；在sl基因系统进化树分析中，毒株 较高的氨基酸同源性，同时，此三个毒株具有相同的插入和缺失位点，具有相似的纤突蛋白裂解位点，然而经过N 上分析表明毒株傩脚sD／05I可能是在Ⅲ疫苗免疫选择压力下所产生的变异毒株；毒株a酞m仙qM，05I和毒株 a淡凰卧3)∞6I可能发生了基因重组；同时，以疫苗株H120作为参考毒株，分析发现，12株mv分离株在s1蛋 白基因的HvRl和HvR2高变区内舍有较多插入和缺失现象；N基因及其局部功能区序列存在广泛的氨基酸替代现 象． 以上分析结果表明，我国mv分离株存在较为广泛的基园突变、插入和缺失，同时。mv毒株问的基因重组也 可能是我国mv变异株产生的另一主要原因． 经s1基因系统进化树分析发现，本实验所分离的大多数mv毒株(8，12)分布于同一基因进化群内，并且亲缘关 系较近，因此，我们对此群中mv毒株c姗珊IJ)I巾5H的致病性进行研究，以1 053×EⅢ5扣．1m1的病毒接种15日龄的 肾”。肾小管和输尿管扩张并且有尿酸盐沉积为主要病理变化． 关键词：鸡传染性支气管炎病毒，中国分离株，纤突蛋白基因，遗传变异 Abstract Thc ch蹦啪dcs“衄dyeavi姐in缸d01ls is01ated丘om Biological bfonchi凼咖s嚣(ⅢV)wefe order outl，realcs缸chicke∞in ben^雠n2005柚d2006 to廿∞e eight w盯e锄alyzcd．h provin懈ofChina 也esol】rceofdome鲥cmV de魄mincmV in nle isolates，to alina，and g∞o哆p∞％ist phylogen曲c b酞we∞(：hin留eiso№缸drcfefences仃ains． IeMonships Char孔teriza缸onof r01