16s rrn探针杂交技术对瘤胃内主要纤维分解菌动态变化规律的研究.pdfVIP

摘 要 本研究选择9只体重相近的安装永久性瘤胃瘘管的健康蒙古羯羊，分为3组， 中序列配对，选择并合成了地高辛标记的3种纤维分解菌(黄化瘤胃球菌、白色瘤 胃球菌、产琥珀酸拟杆菌)的16S rRNA种特异性寡核苷酸探针和1种细菌通用探 针，以及18S rRNA种特异性的真菌通用探针，与瘤胃内容物中分离出的RNA样品 进行定量斑点印迹杂交，测定这3种纤维分解菌的相对含量和瘤胃真菌数量的动态 变化。试验期间采集瘤胃液和瘤胃内容物样品，对瘤胃发酵指标pH值、NH。一N浓度、 rRNA 挥发性脂肪酸浓度、菌体蛋白进行测定并进行动态变化分析。试验建用了16S 定量杂交分析法测定瘤胃菌体数量的方法。研究结果表明： 1．高GI组、中GI组、低GI组三组白色瘤胃球菌的相对数量分别为2．69± ±0．71％、5．27±0．63％、3．63±1．06％。 2．高GI组白色瘤胃球菌、产琥珀酸拟杆菌的相对数量最高(p0．01)，黄化 瘤胃球菌在低GI组饲料条件下是优势菌(p0．01)；3种纤维分解菌的总相对数量 高GI组中GI组、高GI组低GI组(pO．01)： 3．白色瘤胃球菌在瘤胃细菌中的相对数量为2．09％，黄化瘤胃球菌的相对数量 为2．70％，产琥珀酸拟杆菌在瘤胃细菌中的相对数量为5．54％。3种纤维分解菌的相 对数量为lO．35％： 4．瘤胃内真菌数量中GI组低GI组高GI组(p0．01)。 5．三种不同品质粗饲料条件下，高GI组相对于中GI组和低GI组，对瘤胃环 丁酸浓度、总挥发性脂肪酸浓度高GI组和中GI组两组接近，高GI组略高。高GI 组瘤胃发酵情况优于中GI组、低GI组；BCP浓度差异不显著。 综上所述，本试验建立了一种运用16S rRNA特异性探针定量杂交技术检铡瘤 胃微生物菌群数量的方法。同时对反刍家畜粗饲料的科学利用，降低生产成本，提 高经济效益具有一些指导意义。 rRNA／18SrRNA定量斑点印迹杂交 关键词：瘤胃纤维分解菌；瘤胃真菌；1jS 粗饲料分级指数GI of of Bacteria Celluloytic Studypopulation inRumeninSitu 16S Specific by HybridizationrRNA-targeted Probes ．Oligonucleotide Abstract In usednineInner wether thathadsimilar this investigation，we Mongofiansheep andsteeredwithruminalcarmula．Theseweredivided、^，imthree weight sheep groups andfedwithmixed ratioof were optimized forages(concentrate：roughage8：2)that by