prrsam;cpv胶体金免疫层析法的研究.pdf

中国农业人学坝}生论殳 摘要 本埘}究利}}i柠檬酸二钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应州一定直径的胶体金颗粒标 记抗体，从而建立起以免疫层析为基础的胶体金标记的诊断方法。这一诊断方法可以州米 诊断抗体，也可以埘米诊断抗原。本研究从两方面入手，分}；|j对抗原与抗体进行快速诊断。 VR一2332病毒．测得增殖后的PRRSV毒价为 145细胞增殖ATCC 方面府州fMarc 10““】cID。／100ul：通过离子交换法纯化PRRSV单克隆抗体15Al，纯化后的单抗的蛋A苗 为3mg／ml，ELlSA效价为32000以上；通过密度梯度离心法及利_L}j单丘隆抗体的免疫亲和 层析方法纯化PRRS病毒，纯化后的PRRSV蛋白龄为o38mg／ml：_L}j：胶体金颗粒标记羊抗猪 的．抗，在玻璃纤维膜上喷加PRRSV的纯化抗原，制成诊断PRRS抗体的快速诊断试纸条。 f应Hj此试纸条检测6份PRRS附陛与6份PRRS阴性血清，其结果与ELISA方法进行比对， 效果良好，试纸条与猪细小病毒，猪伪狂犬病毒无交叉反府。)一 另一方面应用雠析法对CPV单抗进行纯化，纯化后的CPV单抗1D3的蛋白浓度为 行纯化，纯化后的CPV多抗的蛋白浓度为6．8mg／m]，HI效价在5120以上：用胶体金颗粒 标记纯化的CPV单抗，在玻璃纤维膜上喷加纯化的CPV的多抗，制成诊断CPV抗原的快速 诊断试纸条。f用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品，其结果与HA 结果相比对，HA效价在l：40以上，试纸条均能检测到为卧|=圭。试验证明，CPV试纸条与犬 瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应。酆试纸条保存．：个月后，其检测结果重复性为 100％。试验证明，CPV试纸条是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法，可在临床上广泛 府H{，也可用丁：CPV的流行病学调查。 关键词： 鱼壅星i巨直鎏壁笪垒 猪繁殖呼呼综合征盔塑』!瘟鸯堕lp盗 中困农业人学帧I‘生论义 1d—i forPRRSCPV ReseachofGommunochromatography ABSTACT Tri—sodiumcitratewith chloridewerewarmedandmixedtomake sol gold aqueous up gold Colloidalwere with coulduseto and lgG．This golds coupled assay diagnosticantibodyantigen． FirstColloidalwere with antiswine to a golds coupledgoat IgG preparegold Marc一145cell Porcine immunochromatography toculture reproduetive assay(GICA)．Using and respiratorysyndrome vims(PRRS)，ATCCVR-2332．PRRSV’stiteris 104。TClD5d100pl PurifiedPRRSV and immunosorbent bycentrifuge