pcr检测仔猪痢及多价菌毛油乳剂疫苗免疫原性研究.pdf

中文摘要 Escherichia ／初生仔猪黄痢主要由产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxincoli，ETEC)引 起，ETEC依靠其菌毛粘附因子粘附于小肠内粘膜上皮进行繁殖继而分泌毒素，使仔猪 发生腹泻，使机体水分和电解质大量丧失而衰弱死亡，严重影响仔猪的发育和育成，每 年给养猪业带来巨大的经济损失，采取有效的方法对其进行检测和防制是我们当前面临 的一项重要任务矿本论文针对ETEC菌毛的检测和多价菌毛混合油乳剂疫苗的免疫原性 Chain 一对引物，经PCR扩增，从20株野生分离株质粒中获得17个可疑K88产物，选择其 中8个阳性产物对其进行克隆，经过连接、转化、筛选及核酸序列测定与分析表明，其 物，将其与地高辛标记的K99菌毛蛋白结构基因探针进行斑点杂交，试验结果表明所获 得的12个阳性产物均为K99菌毛蛋白的结构基因片段矿二：对K88，K99菌毛蛋白结 构基因PCR扩增条件进行优化，研制成K88．K99PCR试断试剂盒。f50ul反应体系中最 试剂盒对湖北及江苏的5个猪场238头病猪粪便进行了检查测定，结果K88检出率92．0％ DNA片段。检测结果表明运用PCR诊断试剂盒检测快速、特异，可处理样品多，且可 直接通过粪样检测，值得进一步推广寸三：根据K88．K99PCR诊断试剂盒临床调查结果， 88ad)、HN2004(K99)及标准株C8391 多价菌毛油乳剂疫苗，5批多价菌毛疫苗对小鼠的平均保护率达95．o％(38／40)。(母猪 8．1 免疫15天后血清中菌毛粘附因子抗体效价上升O 1l092，免疫母猪所产仔猪在10同 龄内比未免母猪所产仔猪腹泻的发病率降低11．53％，死亡率降低6．28％。断奶均重增加 O．38kg。免疫仔猪比未免仔猪在断奶前腹泻的发病率降低3．67％，平均死亡率降低3．45％。 研究结果表明所研制的K88．K99．987p．F4l多价菌毛油乳剂疫苗具有良好的免疫原性， 可以广泛应用于实际生产中。、L 关键词：PCR j仔猪黄痢j多价菌毛疫苗j免疫原性， Abstract coilassociatednewborn is Escherichia diarrhea piglets mainly Escherichia adheresand insmallintestine coli(ETEC)，ETECusually proliferates epithelial cellsandsecretestoxinstocause diarrhehandmost and piglets water asa electrolytelost，and failedintoweakandeven framsincuredlosses．Soan result，the death，and piglets pig great taskwhichwe facedwas were with totake effective important measurestodetectand prevent thisdseaseThisarticledealedwiththe