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2016-03-02 发布于贵州
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pcv2全基因克隆及其衣壳蛋白的融合表达.pdf

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pcv2全基因克隆及其衣壳蛋白的融合表达

摘要 PCV2感染引起几种明显不同的病症，包括PMWS、PDNS、繁殖障碍、猪呼吸病综合症、肉芽肿肠炎、坏死性淋巴腺炎、以及可能的渗出性表皮炎。给养猪业带来了很大的经济损失。本研究做了以下三个实验，以获得有效的疫苗，为最终控制该疫病打下基础。 1．PCV2全基因的克隆与序列分析：用PCR扩增PCV2全基因组，株进行了同源性比较及亲缘关系分析。丰富了PCV2基因组序列资料，为以后建立分子生物学诊断方法及研究PMWS发病机制奠定了基础。 2．质粒．在难以实现高效表达的情况下，利用Cap基因本身具有的酶切位点EcoR 下(命名为△Cap)，回收后将其克隆至pETLTB质粒相应位点，成功构建pETLTB△Cap融合表达质粒。用IPTG诱导实现了高效表达，融合蛋蛋白能被PCV2阳性血清识别。 3．重组融合蛋白免疫保护实验：分离纯化LTB△Cap重组融合蛋白，用常规的免疫程序免疫小白鼠。同时设立对照组。最后一次免疫后20天以PCV2感染小鼠组织匀浆进行攻毒试验。攻毒后20天处死，观察对照组和免疫组的大体病变、显微病理变化，用PCR检测实质脏器中的病毒基因组。结果表明免疫组可抵抗PCV2小鼠适应毒的攻击关键词：猪圆环病毒2型；基因克隆：融合表达：原核表达；免疫保护 abstract circovirus thecausativeof Porcine 2(PCV2)is agentpostweaning and dermatitis multisystemiewastingsyndrome(PMWS)，porcinenephropathy disease failure，porcinerespiratorycomplex， syndrome(PDNS)、reproductive tremorand granulOmatousenteritis，necrotizinglymphadenitiscongenital noPCV2vaccinewasavailableSO have exudative far，we epidermitis．Since workweredone a PCV2vaccinecandidate．the three developedspecific through below： assay 1．PCV2 were PCRfromtotalDNAextracted completegenomesamplifiedby fromPMWS PCR wereclonedinto vector samples．Theproducts pMDI$-Teasy ofthe andtherecombinantwereobtained．The clonedPCR plasmids sequences were and