pcr技术检测结核病及hsp65基因的克隆与表达.pdf

摘要 摘要 鹿结核病是一种人畜共患性传染病，广泛流行于世界各地。为确定我国鹿群的结核 病的流行情况，应用聚合酶链反应(PcR)对采自国内某一地区鹿场屠宰点的79份鹿 全血样品进行检测，结果表明鹿群的结核病阳性率为43．O％，其中还有结核分枝杆菌的 感染，证明鹿群中仍然高发结核病。 为了有效预防和治疗鹿结核病，以PCR检测鹿结核病阳性分离菌株基因组DNA为 I，SaLI双酶切处理，回收纯化后，连接 T载体和原核表达载体pGEX．6P．1分别用EcoR 进一步测序鉴定，结果碱基、预测氨基酸序列均与HSP65完全一致，并具有正确的读 码框，获得的重组表达质粒pGEx—HsP65可用于下步表达。 BL21中，鉴定为 大量提取重组质粒pGEx-HSP65，将其转化到表达宿主菌E∞ff 蛋白条带大小约86kDa，与预期的结果相符，经薄层扫描表达外源蛋白量占全菌体蛋白 blot检测，在 86kDa处显示了特异蛋白结合带，表达的蛋白能被PCR检测鹿结核呈阳性的血清特异 地识别，具有良好的抗原性，为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基 础。 关键词鹿结核病；PCR；HsP65基因；分子克隆：原核表达 Abstract isa human in Deer_[uberculosissonofbacterialinfectionbe_[、veen aDd animal，|thappens all tbeworld．Inordertoconfirnltheincidenceofdeer-tuberculosisin Dartsof china， withPCR wholebloodform tuberculosiswasdetected in79samDlesofdeer onearea． 43．O％of were an s锄ples positiVe， indicaciIlg existedindecr． oversDreadoftl】berculosis Tb defendandtreat for HSP65 Deer-tuberculosis，me e脏ctually geneencodingprotein fornlDeer-tubercuIosiss仃ainchrom锄al PCR PCR Was锄plified DNAbytecmque．The strain a11dmePMDl8一Twereco皿ected wast啪sfonnedintohost E^coli pmduct byIigase，it DH5Ⅱ．The was