HPLC-ELSD法测定参芪二甲丸中黄芪甲苷的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC-ELSD法测定参芪二甲丸中黄芪甲苷的含量 徐学山（江苏省盐城市第三人民医院 江苏盐城 224001) 【摘要】目的 建立参芪二甲丸中黄芪甲苷的HPLC-ELSD测定方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)，色谱柱为Agilent-C18（4.6 mmtimes;150 mm, 5mu;m)，流动相乙腈-水(30∶70)，柱温35℃，流速1.6L?min-1。结果 测定了四批参芪二甲丸中黄芪甲苷的含量，建立了该制剂中黄芪甲苷的含量测定方法。结论 该方法简便、快速、灵敏、准确、重复性好，专属性强，可作为参芪二甲丸的质量控制方法。 【关键词】参芪二甲丸 高效液相色谱 蒸发光散射检测法 黄芪甲苷 【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）32-0093-03 参芪二甲丸在临床上主要用于治疗各种肝硬化及慢性肝炎有肝硬化发展倾向者,主要由红参、三七、黄芪、紫河车等中药加工而成。本品具有益气养血、活血软坚。黄芪为该处方的君药，其主要成分黄芪甲苷(AstragalosideⅣ)具有抗炎、降压、镇痛、镇静及促进免疫功能等生理活性，故以黄芪甲苷为其含量测定指标。本品执行标准为《中国药典》，但尚无黄芪甲苷的含量测定方法。本文参考有关文献[2-13]，采用HPLC-ELSD法对制剂中的黄芪甲苷进行了含量测定方法的研究。通过方法学的系统考察和四批样品的含量测定，建立了本品中黄芪甲苷的含量测定方法。 1 实验材料 1.1 仪器与试药 LC-10AT VP色谱系统（日本岛津），Varian380-LC型ELSD系统，Agilent-C18色谱柱(150mmtimes;4.6mm,5mu;m），AS230自动进样器（依利特），CA-3型静音无油空气油泵（武汉科林普丰仪器有限公司），AG135型万分之一/十万分之一电子天平（METTLERTOLEDO），B5200S-DT超声波清洗器（BRANSON）；正丁醇为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水；黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（纯度：95%；批号：110781-200613）。 1.2 样品来源与处理 试验用四批参芪二甲丸均为盐城市中医院生产,其批号分别为: 090502，090503，090504，090505;黄芪及其它药材均购自盐城市中医院药房，经盐城市中医院专家鉴定均为《中国药典》正品。 2 方法与结果 2.1 样品液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品9.48mg置25ml容量瓶中，加入适量的甲醇，超声使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45mu;m微孔滤膜滤过，即得浓度为0.3792mg/ml的对照品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备 取供试品30g，精密称定重量，研匀，精密称取细粉10.0138g，置锥形瓶中,加入甲醇25ml,超声提取30min，过滤,将滤液蒸干，残渣加40ml水，微热使溶解，并转移至分液漏斗中，依次用正丁醇萃取4次（20，20，20，10ml）。合并正丁醇萃取液，用氨试液洗涤2次各40ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次（20，20ml），将正丁醇液水浴蒸干，残渣以适量的甲醇溶解，过0.45mu;m微孔滤膜定容于2ml容量瓶中，作为供试品溶液。 2.1.3 阴性对照品溶液的制备 除去黄芪药材，按处方量比例称取其它各组分，按供试品的制备工艺制成黄芪甲苷阴性对照品，并按上述供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液2ml。 2.2 色谱条件 色谱柱为Agilent- C18柱(150 mmtimes;4.6 mm,5mu;m)；流动相为乙腈-水（30：70）；蒸发光散射检测器；流速1.60L/min；蒸发管温度90℃；雾化器温度50℃；柱温35℃。 2.3 系统适用性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液20mu;l，注入液相色谱仪，结果见色谱图1。试验结果表明，阴性对照品溶液的图谱在黄芪甲苷峰位置处无假阳性峰，黄芪甲苷的保留时间约为12.589min，且与相邻的峰分离度为2.5，柱效按黄芪甲苷计为5836。 A 对照品溶液 图 1 对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图 2.4 线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品10.42 mg，置