HPLC 法在诺氟沙星含量测定中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC 法在诺氟沙星含量测定中的应用 迮宁 杨述凡 营口市药品检验所115000 摘要：目的：建立HPLC（高效液相色谱）法诺氟沙星含量的测定方法。方法 ：采用HPLC 法，Dionex 色谱柱C18 (5mu;,250times;4.6mm )，流动相为甲醇，流速 为1.0ml? min-1，检测波长为285nm。结果：诺氟沙星在 0.20053mg? mL~2.0053mg? mL 之间时出现良好的线性关系，r=0.9996 ；平均回收率达到99.85%，检测 限达到0.005ng。结论 ：HPLC 法操作简便、精准快速、重复性高，可以被用以有效控制诺氟沙星的质量。 关键词：诺氟沙星 HPLC（高效液相色谱） 含量测定 诺氟沙星（C16H18FN3O3）属于氟喹诺酮类抗菌药，具广谱抗 菌药效，特别是对需氧革兰阴性杆菌具有非常高的抗菌活性。诺氟沙 星对体外多重耐药菌也具有非常好的抗菌活性。由于其本身在临床上 具有很好的应用价值，所以诺氟沙星含量的测定始终是医学界的一个 关注点。截至目前，对其含量的测量方法有很多种，但是这些方法存 在明显的缺点。 本试验选用的是美国戴安（Dionex）C18 色谱柱，流动相选用的 是甲醇（用盐酸进行酸化，使pH 为2.5），用紫外可见检测器，对 诺氟沙星胶囊中的诺氟沙星含量进行了测定。最后发现，此方法操作 简便、精准快速、重复性高，可以被用以有效控制诺氟沙星的质量。 1 仪器与试药 Dionex UltiMateTM 3000 型液相色谱仪，包括UltiMate? 3000 times;2 Dual（DGLC）WPS-3000TSL 自动进样器，TCC-3100 柱温箱， VWD-3400RS VWD紫外可见波长检测器等。 流动相：甲醇选用HPLC 级，并对其进行浓度为0.1 mol? L-1 的 盐酸酸化，将pH 值调为2.5，过滤后待用。 诺氟沙星标准溶液：称取定量的诺氟沙星放于50ml 的容量瓶中， 经调剂好的甲醇超声波震荡搅拌溶解，并待其至室温后，用酸化后的 甲醇将其稀释至刻度，浓度为1.0 g? L-1。使用时再结合具体实际将 其稀释成各种浓度的工作溶液。 试剂采用分析纯，水采用离子水经过二次蒸馏。 2 色谱条件 色谱柱为Dionex C18（5mu;，250times;4.6mm ）；流动相甲醇；流速 为1.0ml? min-1；检测波长为 285nm；柱温为 30℃；进样量为20mu;l。 3 溶液配制 诺氟沙星在有机溶剂中，包括甲醇、丙酮以及乙醚等，都比较容 易溶解。若是选用丙酮和乙醚作为溶剂的化，诺氟沙星会出现极性增 大现象，保留时间变短，丙酮为1.16min，乙醚为1.35min，由此不能 够有效与样品中杂质峰产生分离。而甲醛的极性刚刚合适，作为溶剂 时，虽然色谱峰有严重的拖尾现象，但是在对其盐酸酸化处理后，能 够有效抑制诺氟沙星分子中羧基上氢的离解，形成对称性好、峰形尖 锐的色谱峰，如此，诺氟沙星和样品中杂质峰便可有效分离。因此， 本实验的流动相选用了经过盐酸酸化处理后的甲醇作为溶剂，同时还 有效地避免了样品进样时由于溶液混合而导致的基线波动现象发生。 4 优化流动相 用浓度为0.02 g? L-1 诺氟沙星标准溶液，严格按照具体实验步 骤，对流动相甲醇进行多组实验。实验结果表明：选用甲醇作为流动 相时，会出现严重的色谱峰拖尾现象；选用甲醇-水作为流动相时， 由于水的作用，几乎没有产生峰；选用经盐酸酸化处理后的甲醇作为 流动相时，形成的色谱峰具有形状规则、面积大、逢高最大的良好效 果。 此外还发现，保留时间、峰形与甲醇的酸度存在密切联系，当甲 醇的pH 小于2.5 时，保留时间变长，峰形也较规则，但是酸度过高 对HPLC 系统产生不利影响；当pH 值高于2.5 时，峰形会随之变钝， 并随着pH 值的增大，拖尾现象也愈加严重，保留时间也越来越短。 经过对甲醇的一系列实验，最终选取保留时间为4.5min，盐酸酸化后 pH 值为2.5 的甲醇为流动相。此外，进样量也会影响色谱峰锋面面 积和峰高，后两者与前者成直线正相关。在0~0.200 0g? L-1 线性之 间，进样量为3mu;L,能够有效确保检测器在同一感度之下进行精准测 定，避免由于感度改变导致的实验误差现象。 5 线性、重现性试验 在实验状态下，分别选取浓度不同的诺氟沙星标准溶液进行进 样，并及时记录各自不同的色谱峰面积和峰高。当