56肾切除慢性肾衰竭大鼠残肾组织tgf-βsmads信号传导通路smad2、smad7的定位及表达.docVIP

精品论文 参考文献 56肾切除慢性肾衰竭大鼠残肾组织TGF-βSmads信号传导通路Smad2、Smad7的定位及表达 楚雄医药高等专科学校 云南 楚雄 675005 基金项目： 2009年国家自然科学基金资助项目(项目名称:降浊颗粒对慢性肾衰大鼠肾纤维化TGF-beta;/Smads信号传导通路的影响;项目编号通讯作者：吉勤 单位：云南中医学院第一附属医院肾病科 摘要【目的】：通过大鼠动物实验，观察5/6肾切除诱导的大鼠慢性肾功能衰竭(CRF)残肾 Smad2、Smad7 蛋白及TGF-beta;1 mRNA 表达。以探讨Smad2、Smad7及TGF-beta;1 mRNA 对慢肾衰肾纤维化的机理。 【方法】：选符合标准Wistar大鼠30只，随机分为3组。即：①正常组；②假手术组；③5/6肾切除组。2期手术后大鼠自然喂养连续7周，检测血清BUN、Scr，之后自然喂养60天后全部处死，留取肾组织、股动脉血标本送检。检测指标①血清BUN、Scr；②免疫组化法检测大鼠肾组织中Smad2、Smad7的表达。③ELISA检测试剂盒检测TGF-beta;1 mRNA 。 【结果】：①与假手术（对照组）相比，Smad2蛋白在5/6肾切除CRF大鼠残肾肾间质表达显著增多(P lt; 0.01)，在肾小管上皮细胞的表达均明显增多(P lt;0.05) ,并与TGF-beta;1表达上调成正相关;而Smad7 蛋白在肾小管中的表达明显下降(P lt; 0.01)，在肾小球中及肾间质的表达下降(P lt; 0.05)) ,且与TGF-beta;1表达上调成负相关。TGF-beta;1在 CRF大鼠肾脏表达较假手术大鼠明显增多(Plt;0.05)。结果提示，作为TGF-beta;/ Smads 信号通路的成员，抑制性Smad7在 CRF肾纤维化发生发展过程中可能起重要的反馈性抑制作用；受体调节型Smad2 在 CRF肾纤维化发生发展过程中可能起重要的促进性作用。 【结论】TGF-beta;/ Smads 信号通路参与了慢肾衰的肾纤维化进程 ，Smad2 蛋白过度表达和Smad7 负调控不足可能是导致大鼠残肾纤维化的主要原因。 关键词：5/6肾切除； 慢性肾衰竭； Smad7； 转化生长因子 -beta;1 【中图分类号】R248.3【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0317-02 当前，国内外关于CRF的发病机制研究颇多，其中肾间质纤维化是慢性肾脏病(CKD)进展致CRF的主要原因之一[1]。大量研究文献资料显示，肾间质纤维化在CKD进展中起着主导作用，其病变程度与CKD的预后密切相关。目前肾间质纤维化及肾小球硬化的机制目前并未完全明确，其中相对明确的是TGF-beta;1/Smads信号传导通路的激活,这是导致肾纤维化的重要环节[2]。近年研究表明Smad蛋白家族是TGF-beta;超家族胞内信号转导的重要调控因子，且是目前所知的唯一的TGF-beta;1受体的胞内激酶底物[3]，介导TGF-beta;1细胞内反应的主要通路, Smad蛋白依赖磷酸化在细胞质和细胞核间进行穿梭对于TGF-beta;1信号的动态调控具重要作用。Smads蛋白按结构和功能分3大类：第1 类是受体调节型 (R-Smads)：即Smad1、Smad2、Smad3、Smad5和Smad8；第2类是抑制型（I-Smads)：即Smad6及Smad7； 第3类是共同调节型 (Co-Smads)：即Smad4，10。TGF-beta;1介导的肾纤维化可被Smad2/3激活，被Smad7所阻断；Smad2，3，4，7蛋白参与TGF-beta;/Smad 信号转导[4-5] 。 本实验研究采用免疫组织化学染色（SP法）技术分析测定Smad2、7。细胞膜或胞浆出现棕黄色染色为阳性。ELISA检测试剂盒检测TGF-beta;1 mRNA 。探讨Smad2、Smad7及TGF-beta;1 mRNA 对慢肾衰肾纤维化的机理。 1. 材料与方法 1.1 试剂与实验药物:Smad2兔多克隆抗体、Smad7兔多克隆抗体购自Abcam艾美捷科技有限公司（ab6584）；SP免疫组化检测试剂盒(兔) 购自北京博奥森生物技术有限公司（sp-0023）；DBA显色试剂盒及快捷型酶标羊抗兔IgG聚合物均购自福州迈新生物技术有限公司；PBS液等免疫组织化学检测所需试剂由昆明医科大学口腔医学院重点实验室提供。 1.2动物模型的制作: Wistar雄性大鼠36只，2级，动物合格证号：SCXK(川)2011-18，体重（220 plu