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P选择素在结直肠癌表达及临床意义 　 作者：晋雯 ，林志武 ，高美钦 ，杨代兴 【摘要】 目的 探讨P选择素在结直肠癌细胞的表达情况与临床病理关系及预后的意义。 方法 应用链酶素-生物素（SP）免疫组织化学法，对62例结直肠癌及5例正常肠黏膜进行P选择素的检测。 结果 P选择素在正常组织中未见表达，在结直肠癌组织中阳性表达率为67.74%，其阳性表达与患者的性别、肿瘤的组织分型、分化程度均无关，与癌性血栓形成及Dukes分期有关（Plt;0.05）。P选择素阳性者5年生存率及平均生存期［52.38%，（33.33±18.52）月］均低于P选择素阴性者［80.00%，（50.83±15.23）月，Plt;0.05］。 结论 P选择素在结直肠癌中的高表达与肿瘤的转移潜能有关，对判断结直肠癌的预后有参考价值。 【关键词】 结直肠肿瘤;P选择素;肿瘤转移;预后 　选择素是新近发现的细胞黏附分子中一个家族，通过启动肿瘤细胞黏附的始动机制，介导肿瘤细胞与内皮细胞的黏附。其中P选择素存在于血小板与内皮细胞内，能介导内皮细胞和血小板与肿瘤细胞之间相互作用，可能与肿瘤的转移有关 ［1-2］ 。笔者用免疫组织化学方法研究P选择素在癌组织中的表达，探讨P选择素在结直肠癌转移中的作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 1995-1998年福建省立医院资料完整的结直肠癌患者的存档标本62例。一般情况:男性30例，女性32例，年龄（57.26±1.48）岁（78～27岁）。选取5例正常肠黏膜为对照组。所有材料按照全国结肠癌协作组制定的标准 ［3］ ，由两名病理医生复查确定。 　　1.2 主要试剂 羊抗人单克隆抗体P选择素、SP试剂盒（北京中山生物工程公司）。 　　1.3 方法 蜡块重新制成5μm厚切片，SP法检测P选择素，阳性对照选自已知的阳性片，阴性对照由PBS代替一抗。具体操作步骤如下:（1）切片烤箱烘烤60℃10min，常规二甲苯脱蜡至水化，蒸馏水洗5min;（2）0.1mol/L枸橼酸修复液400mL（pH6.0）隔水蒸馏于高压锅内，待水沸腾，将切片放入修复液内，加盖、加热，喷汽计时3min，保留5min，自来水冲洗至37℃;（3）蒸馏水洗5min×2;（4）滴加A液，室温放置10min;（5）蒸馏水洗5min×2，PBS洗5min×1;（6）滴加B液，放置37℃水浴槽15min;（7）滴加一抗（1∶50），放置37℃水浴槽1h;（8）PBS洗5min×3;（9）滴加二抗放置37℃水浴槽10min;（10）PBS洗5min×3;（11）滴加D液，放置37℃水浴槽10min;（12）PBS洗5min×3;（13）DAB显色4～8min。 　　1.4 结果判断 以血管内皮细胞细胞膜出现棕黄色为阳性，高倍镜下选择10个视野计数，血管≥5条为阳性，其中5～9条为“+”，10～19条为““，≥20条为“”。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件包进行t检验。 　　2 结果 　　P选择素在正常肠黏膜中均未见有阳性表达。62例结直肠癌组织中阳性表达为42例，表达率67.74%。阳性表达主要位于中等大小的动静脉的内皮细胞的细胞膜上，毛细血管几乎未见表达。部分肿瘤细胞的细胞膜上有轻度的阳性反应（图1）。P选择素阳性表达12例“+”，8例“”，22例“”。P选择素表达与患者性别、年龄、组织学分型及分化程度无关，但与血栓形成、Dukels分期有关（表1）。 　　表1 P选择素表达情况及其与临床病理特征的关系（略） 　　组内阳性率比较，*:Plt;0.05. 62例结直肠癌患者均随访5年以上，其中P选择素阴性者20例，死亡4例，5年生存率80%，平均生存期（50.83±15.23）月;阳性表达者42例，死亡20例，5年生存率52.38%，平均生存期（33.33±18.52）月，两者差异有显著性（Plt;0.05）。 　　3 讨论 　　肿瘤转移是恶性肿瘤致死和临床治疗远期疗效差的主要因素，肿瘤转移是一个复杂的多分子参与的多环节过程，主要包括下列过程:癌细胞在原发瘤上的分离、脉管内异质或同质瘤栓形成、在靶器官大量增殖形成转移灶。其中与血管或淋巴管的黏附是肿瘤转移过程中的一个关键环节。在这一过程中，肿瘤细胞移动速度减缓，从轴流进入边流，进而在内皮细胞表面滚动，以利于其黏附与渗出，整个过程类似于白细胞在炎症局部的聚集与滚动。该过程有可能部分是由选择素蛋白所介导的，包括P选择素 ［1-2］ 。P选择素是一类涉及白细胞与内皮细胞的黏附分子，为高度糖基化的单链跨膜糖蛋白，结构特点是其细胞外区域的氨基末端有凝集素样区，约含120个氨基酸残基，接着为表皮生长因子样区，约含40个氨基酸残基，最后与跨膜区相接的是一系列重复的蛋白区