RANTES、MIP1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动机制探究.docVIP

RANTES、MIP1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动机制探究 　 作者：王晓颖 樊嘉 周俭 邱双健 吴晓峰 刘银坤 汤钊猷 【摘要】 目的 探讨RANTES、MIP1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制。方法 使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察RANTES、MIP1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(Factin)聚合的变化。采用明胶酶谱法分析RANTES、MIP1α对人肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响。结果 RANTES、MIP1α可诱导人肝癌细胞内Factin的聚合，并刺激细胞突起和伪足形成。明胶酶谱显示RANTES、MIP1α刺激后人肝癌细胞基质金属蛋白酶MMP2、MMP9等活性显著增加，降解基质能力增强。结论 RANTES、MIP1α趋化因子可以诱导Factin聚合促进人肝癌细胞定向运动，并通过增加基质金属蛋白酶活性提高人肝癌细胞侵袭能力。 【关键词】 肝肿瘤； 趋化因子； 细胞运动； 肿瘤浸润 Mechanism of RANTES and MIP1α promoting invasion and migration of hepatoma carcinoma cells 【Abstract】 Objective To investigate mechanism of chemokines including RANTES and MIP1α promoting invasion and migration of hepatoma carcinoma cells (HCC). Methods The polymerization of HCC Factin stimulated by RANTES and MIP1α was evaluated by flow cytometry and confocal microscope. Gelatin zymography assay was used to observe effect of RANTES and MIP1α on secretion and activity of matrix metalloproteinase of HCC.Results Both RANTES and MIP1α could prominently promote polymerization of Factin and formation of cell process and pseudopodia of HCC. Gelatin zymography assays showed that the activities and degeneration potential of MMP2 and MMP9 in HCC were increased following stimulation with RANTES and MIP1α. Conclusions Both RANTES and MIP1α can promote migration of HCC by inducing polymerization of Factin and increase invasive potential of HCC by enhancing activity of MMPs. 【Key words】 Hepatoma carcinoma; Chemokines; Cell migration; Tumor invasion 趋化因子(chemokines)是一类分泌型小分子蛋白质。近来发现其与肿瘤侵袭转移密切相关［1-2］。我们前期研究发现肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其配体RANTES、MIP1α等趋化因子可以促进肝癌细胞侵袭运动［3］。为进一步阐明RANTES、MIP1α等趋化因子促进肝癌细胞侵袭运动的机制，本研究深入观察RANTES、MIP1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(Factin)及基质金属蛋白酶变化情况。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 高转移人肝癌细胞株MHCC97H由本所建立。采用DMEM培养液，37 ℃、5%CO2饱和湿度的条件下培养。 1.2 悬浮细胞肌动蛋白聚合试验 将处于对数生长期的MHCC97H人肝癌细胞常规消化脱壁， 重悬于PBS， 浓度为1×106个细胞/ml。取上述细胞悬液分别加入含100 ng/ml的RANTES或MIP1α(Ramp;D公司)无血清DMEM培养液，不加趋化因子为空白对照。分别于趋化因子刺激后15、30、60、120、300和600 s时，加入固定染色液［含0.1 mg/ml LPC，磷酸缓冲液配制的10%福尔马林，1.65×10-6 mo