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优势石油降解菌最佳生长与除油条件的研究 　　The Study of Predominant Strain Best Conditions of Growth and Degreasing for Biodegration Petroleum Soil 　　 　　 Duan Gending 　　（Xian Aerotechnical College，Xian 710077，China） 　　 　　摘要：对从长庆油田石油污土壤中培养、驯化、筛选的优势菌种的除油和生长条件进行了研究，发现该菌种适合的pH值为7-8.5；所需营养物质氮、磷最佳比为4:1；适应最大石油污染浓度为2000mg/L。 　　Abstract: Selected the pollution soil from the Changqing oil field, the cultivation, domestication, selection of the predominant bacteria in the degreasing and growth conditions were studied. The experimental results indicated that the strain were efficient pH under of 7～8.5, the best the ratio of nitrogen/phosphorus was 4:1, which can afford the maximum concentration of oil pollution was 2000mg/L. 　　关键词：石油污染土壤 最佳条件 除油率 　　Key words: petroleum-contaminated soil；the best conditions；oil removal 　　中图分类号：S53文献标识码：A文章编号：1006-4311（2011）２6-0035-02 　　0引言 　　石油已经成为我们生活中必不可缺的能源之一，但在使用石油的同时她已经严重污染了我们生存环境，主要表现为对土壤的污染。土壤受污染后的主要危害表现如下：土壤的通透性变差，阻碍植物根系的呼吸与吸收，从而影响作物生长；石油中的多环芳烃能通过食物链在动、植物体内逐级富集，且具有致癌、致变、致畸作用，被奥地利W MStigliani及荷兰IrFAM DeHan等[1]科学家比喻为“化学定时炸弹（ChemicalTime-Bomb）”。传统的物化修复费用昂贵且易产生二次污。新兴的生物修复技术具有投资少、费用低、无二次污染等优点而备受青睐。但其还处于初生阶段，还需进一步研究和探索。本文针对陕北地区石油污染土壤筛选出的高效除油菌种的生长环境和除油条件进行了探索性研究，为陕北革命老区石油污染土壤生物修复处理贡献微薄之力。 　　1实验材料与方法 　　1.1 设备OCMA-350 非分散红外石油含量分析仪；可见分光光度计；DH4000-AB型电热恒温培养箱。 　　1.2 材料 　　1.2.1 培养基富集培养基[2]：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7.2～7.4，配制固体培养基需另加入20 g琼脂。 　　无机盐培养基[3]：NH4NO3 2g/L，K2HPO4 1.5g/L，KH2PO4 3g/L，MgSO4?7H2O 0.1g/L，无水CaCl2 0.01g/L，Na2EDTA?2H2O 0.01g/L，pH值为7.5。 　　1.2.2 油样和菌液实验将原油用石油醚溶解，然后在60-70℃水浴上蒸出石油醚，并在70℃恒温干燥箱赶尽残余石油醚，即得标准油样品； 　　菌悬液的制备：将37℃下生长24h的斜面菌种（从石油污染土壤中培育、筛选的优势菌种），无菌操作接种到装有100mL富集培养基的250m L三角瓶中，在35℃、400r/min的恒温摇床中好氧振荡培养48h，然后将种子液离心、用磷酸盐缓冲液反复洗涤，最后配制成一定浓度的菌悬液备用。 　　1.3 检测方法 　　1.3.1 菌体生长量测定：使用可见分光光度计，460nm波长[4]测定培养液的光密度（OD），以此表示菌体生长量。 　　1.3.2 石油含量测定：将培养了一定时间的含油水样倒入分液漏斗内，加入甲基橙几滴，用HCl调至红色，使其pH值2，再加入适量的NaCl。加入萃取剂CCl4分萃取，萃取后定容于50mL容量瓶中使用OCMA－350非分散红外石油含量分析仪测定。 　　1.4 试验方法以无机盐培养基为基础，分别改变石油浓度、pH值、N、P元素的添加比例因素，在35℃，400r/min 的恒温摇床上进行振荡培养，连续培养一定时间以后，取样观察