以nptⅡ为选择标记基因的TA克隆植物表达载体的构建.pdfVIP

分子植物育种 ，????年，第 ??卷 ，第 ?期 ，第 ???—???页? ? ???????????????????????，????，???．??，??．?，???— ???? 技术主题? ??????????????????? 以 ??????为选择标记基因的 ??克隆植物表达载体 的构建? 韩 国粉 张志宏 马跃 李 贺 刘 月 学 代红 艳? 沈阳农业大学园艺学院，沈阳，???????? 通讯作者，?????????????．???? 摘? 要 ?? 克隆载 体 由于 能够用 于 ???产 物 的快 速 克隆 ，且 操 作简 单 ，因此被 广 泛应 用 。本 研 究 的 目的? 在于构建一种可以直接连接 ???产物的 ??克隆植物表达载体，其在植物细胞中表达的筛选基因为 ???Ⅱ。? 首先 我 们 向植 物 表 达 载 体 ?????。????中引 入 包 含 ?个 ?????酶 切 位 点 的 ?? 克 隆位 点 序 列 ，然 后 对? ?????．????载 体原 有 的 ?个? 。???酶切位 点逐一进 行 定 点突变 ，最终 获得 了以? Ⅱ为筛 选基 因 的 ??克? 隆植物 表达 载体 ，命 名 为 ???。用? ????酶切 ???载 体 ，得 到两端含 有 ?末端 的线 性载体 ，该线性 载体 可 以? 直接 与 ???产物 连接 。为 了验 证 ???载 体 的有 效性 ，本研 究利 用 ??? 技术 从 ???????一??????载体 上扩? 增 ???基因全长序列 ，将 ???基 因连接到 ???载体上 ，构建 出 ???基因的过表达载体 ???—???。将? ???—???导入根癌 农杆菌 ??????，并进行 烟草 叶片转 化 。利用 ???组织染 色法对 侵染后 的烟 草 叶片进行? ???瞬时表达分析，结果显示 ???．???上的 ???基 因在烟草细胞中高效表达。本研究获得的???载体适? 合用 于构建 目的基 因的过表达 载体 ，可 以直接连 接 ???产物 ，节省 载体 构建 的步骤和 时