rt-pcr及flp技术诊断猪瘟的应用研究.pdfVIP

摘要 地区猪瘟瘟毒进行检测。，／实验结果，来自』。两不同地区如：玉林、贵 港、南宁等地的89份疑似猪瘟病料小，55份为f；¨性，…性率高达 61．8％：此外，从百色、柳州采集的健康猪扁桃体和淋巴结共252份， 例为阳性。 蠢 在此基础上，我1『Ⅳ还试图利用限制性片段长度多态性分析法 、， ／(restrictive fragmentlength v’7 因PCR产物进行消化，发现该片段被切割成分子量不同的二个小片 r 置不同。经酶切后形成两个大小不等的核酸片段，从而能将Shimen 株和HCLV株区分开。用同方法分析17份阳性病料和扁桃体中的 RFLP分析法很可能将ItCLV疫苗株与其它野毒株加以区分。夕厂 关键词： ucv／ RT—PcR RFLP讫影I烈术 -●-‘__JLl 刖 茜 猪瘟(Hog Swine (HCV)。猪瘟对养猪业的危害极大，造成严重的经济损失，在国际 兽疫局(OIg)的动物卫生法规巾被列入A类16种传染病之一，即要 求会员国在有该病暴发或流行时，必须报告疫情并按法规检验及遵 守国际农畜产品交换规定。 属，其中两个是黄病毒属和瘟病毒属。经研究发现黄病毒属的基因组 7 结构和基因转录过程与甲病毒属有{醍人不同，黄病惫属的基因纰在5 端无帽子结构，37端无PolyA结构，而甲病毒属这两种结构都有。 科中分离出去并建立一个独立的黄痫磁科。此后，对瘟炳毒属的基因 研究发现，其结构和表达方式与黄病毒十分相似，因此在1991年国 际病毒分类委员会又将瘟病毒属纳入黄病毒科。猪瘟病毒的直径约 34—50 nln，病毒表面结构具有囊膜，基因组为单链lE股RNA，分子量约 4．OXl06道尔顿。目前有许多毒株的全基因核苷酸序列已得到测 ， 编码区qI，它们的核营酸数目完全棚同，其同源性很高，与A1fort株 由11个基因组成，其中四个为结构蛋白基因【6】，E2基因所编码的蛋 白质是主要引起中和抗体的产生【6．7-刚。在血清型方面，目前认为只有 一个血清型。 猪瘟已流行于全世界，而第三世界国家的疫情特别严重，这是由 于缺少有效防疫措施，包括疫苗的使川及开发研究，防疫规章制度的 不健全，检疫手段以及基金的短缺等。在中国，有关部门也采取严厉 防疫措施来防止本病的扩大，也包括疫苗的生产和使用，检疫和规章 制度等重要措施的制定，但近年来本病仍不断地发生和报道，有不少 此同时，在广西也有不少的病例报道[15，2叩¨。但在发达国家如：英、 美、法、日等国经过多年的努力，现已宣布消灭了猪瘟n】。 近年来，研究者不断地对猪瘟病毒深入研究，随着科技的发展和 分子生物学的不断应用，在基因工程苗及单克隆抗体方面作了一些尝 试并取得一定成果，给防制猪瘟带来新的想法。在诊断方面，有不少 研究者应用RT—PCR技术对HCV的检测，为研究提供了方便，他们可 在不同的基因部位设计不同引物，f：能扩增出特异性核酸片段【22-25】。 有的设计出的引物对IICV和BVDV都能扩增出特异性核酸片段：有 5’2引。通过这些 的只能分别扩增出HCV或BVDV的特异性核酸片段[2 学方法所不能解决的HCV和BVDV的交叉反应问题，给养猪业带来 十分有用的特异性猪瘟检测技术。 本实验，应用RT—PCR技术对J‘‘西多个养猪场所采集的健康猪扁 桃体、淋巴结和从疑似猪瘟发病猪的肾脏、脾脏等以及一‘些无症状 的猪瘟发病情况及分析其发生与流行病学有关的规律，为广西猪瘟的 预防提供科学依据。 1．材料与方法