ra分子流行病调查和fq-pcr检测人工感染ra在雏鸭体内的动态分布规律研究.pdfVIP

摘 要 本论文根据鸭疫里默氏杆菌(RA)的16SrDNA序列设计常规PCR；J』物，扩增出 了838bp的预期片段，成功建立了能够特异检测RA的PCR方法，对大肠杆菌、沙门氏 菌、金黄色葡萄球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、芽胞杆菌的检测呈阴性，最低 能够检NN20fg的RA．DNA。 应用建立的PCR方法对四川地区健康鸭群及养鸭环境RA的携带情况进行分子流 行病学调查，结果表明：健康鸭群及养鸭环境的饲料、饮水、垫料等是携带RA的重 要场所。 根据我们实验室发现的RA荚膜多糖蛋白基因序列(DQl51838)，设计并合成荧光定 ％，DNA拷贝数在loo一108范围内扩增曲线有良好的线性关系，最低能够检测到RA的DNA 104倍，而对大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的检测呈阴性；与RA人工感染致死雏鸭 的心、肝、脑细菌分离的符合率为100％；对临床送检具有典型RA症状和病变的死亡 雏鸭的肝脏、心血和脑组织的检出率显著高于细菌分离率。 应用建立的FQ—PER方法对1／10LD50 RA感染雏鸭体内的动态分布的检测结果表 明：RA感染雏鸭后2h即可在皮注组的心、肝、肺、胸腺、食道，口服组的食道、气管、 十二指肠、咽喉拭子，滴鼻组的心、肝、食道、气管、十二指肠、肺、胸腺、咽喉拭 子中检测到RA核酸；感染4h后，各组除了脑和血液(口服组的胰腺也未检测出RA)， 其它所有采集的样品中均检测到了RA核酸的存在；感染8h后，除了口服组的脑外，其 它所有样品均检测到了RA核酸。心、肝、胸腺RA含量最高，其次是肺、肾、脾和法 氏囊，脑和胰腺是含量相对较低的器官。 关键词：鸭疫里默氏杆菌(RA)，PCR，FQ—PcR，分子流行病学调查，动态分布 RA ofthe Molecular of andresearches epidemiologysurvery dynarnic RA distribution inducks infectedwith regularpattern artificially student：DuanZe Postgraduate Directed byChengAnchun，WangMingshu ofAnimalScience (1．College andVeterinaryMedicineofSichuanAgricultural andHumanHealth ofAinmalDisease Laboratory University,Yaan，Sichuan，China，625014；2．Key ofSichuanProvince，Yaan，Sichuan，China，625014) Abstract Inthis established can study，a usingthel6SrDNAsequencesofRA．It specificPCRassaywas a about from wecann’tthesanle