H3和H4亚型禽流感病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdfVIP

H3和H4亚型禽流感病毒双重实时荧光定量 PCR检测方法的建立木 刘婷婷1，谢芝勋2”，宋德贵1，谢志勤2，邓显文2，谢丽基2，黄莉2，罗思思2，黄娇玲2，曾婷婷2 (1．广西师范大学生命科学学院，广西桂林541004； 2．广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001) influenza 摘要：根据H3和H4亚型禽流感病毒(Avianvirus，AIV)HA基因的保守序 列，分别设计合成特异性引物和用不同荧光基团标记的TaqMan探针。通过优化反应条件 建立了H3和H4亚型AIV双重实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示该法特异性好， 敏感性达1000拷贝，¨L；组内重复与组间重复性的平均变异系数均小于3％；应用该法对 96份临床样品检测，结果与病毒分离鉴定结果一致。建立的H3和H4亚型AIV双重实时荧 光定量RT—PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点，可用于H3和H4亚型AIV的快速 诊断和监测。 关键词：禽流感病毒；H3和H4亚型；实时荧光定量RT—PCR 中图分类号：S852．65 文献标识码：A 文章编号：1004-6364(2015)07—20—05 forDetectionof ofa Real--timePCR DevelopmentDuplex H3andH4 ofAvianInfluenzaVirus+ Subtypes LIU Zhixun2*,SONGDeguil，XIE Xianwen92,XIELiji2， Tingtin91，XIE Zhiqin92,DENG HUANG Sisi2,HUANG Liz,LUO Jiaolin92,ZENGTingtin92 541 ofLife Normal 004； University，Guilin，Guangxi (1．College Science，Guangxi and ofAnimalVaccines Veterinary 2．GuangxiKeyLaboratory Diagnostics，Guangxi Research 530001) Institute，Nanning，Guangxi were to theconserved ofthe Abstract：The and sequences specificprimersTaqManprobes designedaccording ofH3andH4 avianinfluenza reationconditions hemagglutinin(HA)genessubtypes virus(AIV)，respectively．T