利用PCR-DGGE技术分析微生态制剂在传代过程中的菌群变化.pdfVIP

维普资讯 第43卷 第 7期 山 东 大 学 学 报 (理 学 版) 2008年 7月 Vo1．43 No．7 JournalofShandongUniversity(NaturalScience) Jim．2OO8 文章编号：1671-9352(2008}07-0056-05 利用 PCR—DGGE技术分析微生态制剂 在传代过程中的菌群变化 马俊孝 ，孔健 ，季明杰 (1．山东大学微生物技术国家重点实验室，山东 济南 250100；2．康地恩生物集团，山东 青岛266061) 摘要：利用变性梯度凝胶电泳(denaturingsra~entgelelectmphoresis，D(E)技术，结合传统平板培养法对实验室研制 的1种由乳酸茵和芽孢杆茵组成的微生态茵剂WS-401及其在连续转接培养过程中细茵种群组成的动态变化进行 分析。WS-401原液的活茵数为2XicycfuImL，且细胞个体形态多样。将分离自原液的3株细菌进行DGGE分析， 出现2种指纹谱带，对照标准的DGGE指纹图谱库和序列分析 ，分别被鉴定为蜡状芽孢杆茵(Bacillusoereu$)和嗜热 链球茵(Streptococcusthermophilus)。将该茵剂分别在 LB和MRS两种培养基 中3O℃或37℃连续转接 5次，DGGE分 析每次转接后培养物的茵群组成，结果发现 ，随着转接次数的增加，微生物茵群的种类减少，在 I 培养基 中转接 5 次后优势茵群只有蜡状芽胞杆茵，而在 MRS培养基中转接后优 势茵群为植物乳杆茵 (Lactobacillusplantanmt)和类 干酪乳杆茵(咖6Ⅱ paracasei)。由此说明，微生物的营养基质和培养条件对微生态制剂在传代过程 中的茵群 组成和动态变化有重要影响。 关键词：微生态制剂；变性梯度凝胶电泳；传代培养；茵群组成 中图分类号：Q939．97 文献标志码：A ApplicationofPCR—DGGE techniqueto moni●torth1eSpecl●esch1angesoi^ microecologicalpreparationaftersuccessivecultures MAJun．xiao一，KONGJian ．JlMing-jie (1．StateKeyLaboratoryofMicrobialTechnology，ShandongUniversity，Jinan250100，Shandong，China； 2，ContinentBiotech，Qingdao266061，Shandong，China) Abstract：Denaturingsra~entgelelectmphoresis(DGGE)techniquecombinedwithclassicalplatecultureandsequencingof pamal16SribosomalRNA (rRNA)geneswereappliedtoexaminemicrobialcommuniytchangesofmieroeeologicalpreparation， whichwascodde asWS-401，composedoflacticacidbacterianadBoxillus sp．，nadsubjcetedtosuccessivesub-culturedpro． cesses．ThepopulationofbacteriawihtadiversemorphologyinWS-401preparationWas