利用SSR指纹图谱技术对杂交油菜种质鉴定的研究.pdfVIP

维普资讯 问题探讨 田筑萍 等：利用SSR指纹图谱技术对杂交油菜种质鉴定的研究 利用 SSR指纹图谱技术对杂交油菜种质鉴定的研究 田筑萍。 唐 容。 吴有祥。王通强 (贵州大学， 贵阳550025) SSR UtilizationinYeHow—seededBrassicanapusL．Guiyou519HybridPurityTest TIAN Zhu-ping，TANG Rong，WrU You-xiang，WANG Tong-qiang 摘要：在利用SSR标记构建53份甘蓝型黄籽油菜种质资源的 时空限制和环境影响等优点。本研究选用 目前较为可 DNA指纹图谱的基础上，筛选出一个对黄籽油菜杂种贵油519 靠的SSR分子标记方法，在构建甘蓝型黄籽油菜种质 及亲本具有共显性的SSR引物Ra2A05b，鉴定大田生产F。杂 资源指纹图谱的基础上，筛选对杂种具有共显性的引 种群体的纯度，经与大 田对 比鉴定结果表明：SSR标记鉴定可 物，开展杂种纯度鉴定技术研究，以期为油菜育种及 良 以更多的识另q非杂交种单株。 ’ 种生产的安全使用提供科学参考。 关键词： 甘蓝型油菜；黄籽；杂交种亲本；杂交种纯度； SSR标记 1 材料与方法 中图分类号： S565．4 文献标志码： A 1．1 材 料 文章编号： 1001—4705(2008)06-0069-03 杂种：贵油519(黔黄303A×油研8907)，小区隔 我国油菜育种继20世纪80年代品质改 良育种的 离制种种子。 种质创新之后，通过与杂种优势利用的有机结合，成功 亲本：黔黄303A，油研8907，均为 自交种种子。 实现了优质与高产及抗性的同步突破，育成的杂交品 实验材料由贵州大学油料所提供。 种较过去的常规品种可增产 10％ ～20％，使得我国油 1．2 方 法 菜生产的产量潜力有了较大的提高。我国当前生产应 采用SSR标记技术进行实验室测试鉴定，并结合 用的杂交油菜品种仍以细胞质雄性不育和细胞核雄性 传统的田间鉴定方法进行对比验证。SSR标记鉴定在 不育杂种为主。由于细胞质雄性系的微量花粉和细胞 贵州大学作物遗传育种实验室完成；田间纯度鉴定在 核雄性不育系的可育株等问题 ，致使杂种常存在生产 贵州大学教学实验场进行。 安全问题。因此，对杂交种进行快速、准确、有效的纯 1．2．1 SSR标记鉴定：苗期从田间采集幼嫩的叶片， 度鉴定，是安全生产的重要保证。传统的种子纯度鉴 参照Haymes的简易 CTAB法提取 DNA 】。再进行 定方法虽有较高的可靠性，但受鉴定周期和地域性等 PCR反应及扩增产物的检测，PCR反应 SSR引物(序 问题的影响较大，使其精准性和有效利用受到了限制， 列下载网址：http：／／www．ukerop．net)由上海生工合 且不可从遗传信息作准确评判。借助杂种及亲本遗传 成。PCR反应体系为 10 l，每个反应含模板 DNA25 信息，采用生物技术中的指纹图谱方法，建立一套准 ng，1mmol／L MgC12，1×buffer，1／zmol／L dNTP，0．1 确、简便、快速、高效的鉴定技术体系，这对于提高杂种 z／Taq酶，各0．5mol／L的反向和正向引物。PCR反应 使用的安全性和品种保护都有重要的实际意义。 程序为94aI=预变性5min；(94aI=1min，52—6oaI=30 用于构建指纹图谱的遗传学标记主要包括形态学 S，72oC30