利用TaqMan定量PCR技术不依赖参比内源基因测定转基因植物外源基因拷贝数.pdfVIP

维普资讯 992 中国卫生检验杂志 2008年 6月 第 l8卷 第 6期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Jun2008：Vol18 No6 【论著】 利用TaqMan定量PCR技术不依赖参比内源基因 测定转基因植物外源基因拷贝数 杨冬燕，郭 良让 ，杨小柯 ，杨永存 ，陈宏敏 ，邓平建 (广东省深圳市疾病预防控制中心，广东深圳 518020) [摘要] 目的：建立一种利用TaqMan荧光PCR定量技术不依赖参 比内源基因测定转基因植物外源基因拷贝数的分析 方法。方法：以转基因大豆RRS和转基因玉米Bt176为材料，通过转基因植物外源基因与品系特异序列拷贝数的比较测 定外源基因整合拷贝数。结果：3次测得的Bt176玉米中CrylA(b)基因的整合拷贝数分别为2．69，3．43和2．83，平均为 2．98，标准偏差 (SD)为0．40，相对标准偏差 (RSD)为 13．28％，即CrylA(b)基因在Bt176玉米中的整合拷贝数为3；3次 测得的RRS大豆中EPSPS基因拷贝数分别为 1．08，1．0l，0．96，平均为 1．0l，SD为0．06，RSD为6．o6％，即RRS大豆中 EPSPS基因拷贝数的测定结果是单拷贝。结论：本研究建立的转基因植物外源基因拷贝数测定方法可准确测定转基因 植物外源基因的拷贝数。与现有的通过外源基因与参比内源基因拷贝数比较测定转基因植物外源基因拷贝数的方法相 比，不但避免了选择物种特异性的看家基因及测定看家基因拷贝数等大量工作，而且应用范围更广泛。 [关键词] 转基因；定量PCR；外源基因；拷贝数 [中图分类号] R319 [文献标识码] A [文章编号] 1004—8685(2008)06—0992—05 A method freed from endogenousreferencegenefor estimatingcopy numberoftrans— genesingeneticallymod ifiedplantsbyTaqManquantitativePCR YangDong—yah。GuoHang—rang △ Yang Xiao—ke，Yang Yong—curt，ChenHong —rain△ ， ， Deng Ping-jian (ShenzhenCenterforDiseaseControlandPrevention，Shenzhen518020，China) [Abstract] Objective：Todevelopamethodfreedfromendogenousreferencegeneofrestimatingcopynumberoftransgenesin geneticallymodifiedplantsbyTaqManquantitativePCR．Methods：Thesystem usesTaqManquantitativePCR and comparison withevent—specificsequencesofRoundupReadysoybean(RRS)andBt176maize，torespectivelydeterminethecopynumber ofexogenousEPSPSandCrylA(b)genes．Results：ThecopynumberofintegratedCrylA(b)geneinBt176maizewas2．98， withSD valueof0．40andRSD valueof13．28％ ．ThecopynumberofintegratedEPSPSgeneinRRSWas 1．01．withSDvalueof 0．06andRSD valueof6．06％．Conclusion：Th enewlydevelopedmethod．withmore convenientprocessandwiderapplication， canaccuratelydetemr