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共表达 siRNA-Stat3 与 GRIM-19 质粒对甲状腺 癌细胞的抑制效应及机理探讨 一、研究背景 ? 甲状腺癌 ? 癌基因 Stat3 ? 促凋亡因子 GRIM-19 ? 甲状腺癌 1. 2. 3. 4. 内分泌系统最常见肿瘤 近年发病率上升 约 15% 恶性度较高 复发后再次手术难度大 ? 癌基因 Stat3 1. 公认的癌基因 2. 抗凋亡、促进增殖转化 3. 已作为抗肿瘤靶基因 ? 促凋亡因子 GRIM-19 1. 促凋亡因子 2. 抑制 STAT3 转录激活功能 3. 肿瘤中低表达 二、研究目的 ? 观察协同抑制效应 ? 探讨作用机制 哺乳动物细胞 RNAi 不能完全阻断基因表达： （ 1 ） 异常高表达的基因 （ 2 ） siRNA 同源序列的选择 （ 3 ） siRNA 表达量及稳定性 （ 4 ） 残余 mRNA 所翻译蛋白抑制 RNAi STAT3 信号传导通路 GRIM-19 对 STAT3 的抑制机制 三、方法路线 ? 真核表达质粒 ? 实验流程及方法 四种真核表达质粒结构图 mock 组 psi-Stat3 组 psi-Scramble 组 pGRIM-19 组 pGS 组 转染细胞 显微镜 观察 细胞形态 RT-PCR Western blot 检测基因表达 MTT 实验 检测细胞 增殖活性 划痕实验 Transwell 实验 检测细胞 侵袭迁移能力 Transwell 小室 四、实验结果 1. 各组 SW579 细胞形态及增殖情况 13 2. 各组细胞增殖能力（ 48h ） (* P 0.05 versus Mock and pSi-Scramble;# P 0.05 versus pGRIM-19 and pSi-Stat3) 14 3. 各组细胞 Stat3 、 GRIM-19 mRNA 表达水平 1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (*P 0.01 versus Mock and psi- Scramble;Δ P 0.01 versus pSi-Stat3 and pGRIM-19 ) 15 1:mock; 2: pSi-Scramble;3:pSi-Stat3; 4: pGRIM-19; 5: pGS (* P 0.01 versus Mock and pSi- Scramble ;Δ P 0.05 versus psi-Stat3 and pGRIM-19 ) 5 . 各组细胞迁移能力 (* P 0.01 versus Mock and pSi-Scramble ; # P 0.01 versus pGRIM-19) 17 6. 各组细胞侵袭能力 (* P 0.01 versus Mock and pSi-Scramble; # P 0.01 versus psi-Stat3 and pGRIM-19 ) 18 五 、结 ? 质粒的作用 论 1. psi-Stat3 可抑制 SW579 细胞增殖与侵袭、促进 凋亡 2. pGRIM-19 可抑制 SW579 细胞增殖促进凋亡 3. pGS 有明显的协同作用 19 ? 可能的作用机制 1. RNAi 使 STAT3 蛋白表达下降 2. GRIM-19 表达增强抑制了 STAT3 的转录激活功 能，间接抑制了 MMP9 和 Bcl-2 基因表达 3. 两者协同抑制 Stat3, 致使细胞增殖、侵袭和迁移 能力下降 致 谢 衷心感谢我的导师 XXX 老师！感谢您三年来 的辛勤培养与耐心指导，感谢您在学习和生活 上的关心与照顾。您严谨的治学作风，不倦的 敬业精神是我学习的楷模，在事业上激励我不 断进取。 衷心感谢 XX 外科 XX 主任、 XX 教授、 XX 教 授等各位老师与同学在学习与生活上的教育支 持 与帮助。 衷心感谢基础医学院 XX 教授与 XX 教 授的精心培养严格要求与无私帮助。 21 感谢各位老师百忙之中抽出时间参加论 文答辩，请批评指正。