人、大鼠、树鼩肝癌组织中细胞周期蛋白B2的表达及其意义.docVIP

精品论文 参考文献 人、大鼠、树鼩肝癌组织中细胞周期蛋白B2的表达及其意义 卢晓旭1、2 曹骥2（通讯作者） （1广西医科大学研究生学院 广西南宁 530021；2广西壮族自治区肿瘤防治研究所 广西南宁 530021) 【摘要】目的：研究细胞周期通路中的细胞周期蛋白B2(Cyclin B2, Ccnb2)在人、大鼠、树鼩不同种属的肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达和意义。方法：采用实时荧光定量-PCR(Q-PCR)技术检测人、大鼠、树鼩中Cyclin B2的mRNA表达水平。结果：Cyclin B1 mRNA在人、大鼠和树鼩的肝癌中表达水平均高于正常肝组织（均为Plt;0.05）；在人肝癌组织中的表达高于其对应的癌旁组织（Plt;0.05）；在大鼠、树鼩癌旁组织中的表达高于正常肝组织（Plt;0.05）；其余各组织间mRNA表达水平的差别无统计学意义（均为Pgt;0.05）。结论：Cyclin B2有可能是影响肝癌发生和发展的重要分子之一。 【关键词】细胞周期蛋白B2 跨种属 肝癌 荧光定量PCR 【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）07-0045-02 跨种属筛选肿瘤基因策略是指[1]通过探索比较某些肿瘤在不同种属的基因表达谱中共同拥有的基因改变，筛选出该肿瘤发生发展中起关键作用的分子。基于这一认识，本课题组前期[2]通过生物信息学方法，在人和小鼠的肝癌基因芯片中筛选出Cyclin B2基因在差异表达上有统计学意义。本研究拟通过采用实时荧光定量PCR方法检测Cyclin B2在人、大鼠和树鼩三个种属的肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达，探讨Cyclin B2在肝癌发生发展中的可能作用及意义。 1 材料与方法 1.1 标本收集 1.1.1 人肝组织标本 收集广西医科大学附属肿瘤医院2009年1月～2011年12月手术切除并经病理证实的38例肝癌及对应癌旁组织和10例正常肝组织，正常肝组织来源于肝良性占位病变经手术切除者。肝癌病人术前均无放疗化疗史。 1.1.2 大鼠和树鼩肝组织标本 课题组前期项目已建立用黄曲霉毒素B1( aflatoxin B1, AFB1）诱导肝癌的大鼠及树鼩动物模型。此次实验取大鼠肝癌及其相应癌旁组织各15例、正常肝组织14例，以及树鼩肝癌及其相应癌旁组织10例、正常肝组织10例。 1.2 主要试剂与仪器 RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司（美国），逆转录试剂盒购自Fermentas公司（美国），引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。PCR产物纯化采用杭州博日公司的Biospin胶回收试剂盒，荧光定量试剂盒为TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司的SYBR? Premix Ex Taq? (Perfect Real Time) 试剂盒。实时荧光定量PCR仪为Chromo4 Real Time detector。 1.3 实验方法 1.3.1 总RNA提取（Trizol法）及RNA质量验证 采用Trizol试剂提取组织总RNA。每例取2ulRNA用微量分光光度计测其OD260/280值和浓度。RNA样本的纯度值(A260nm/A280nm) 1.8～2.0为合格。以1.0%琼脂糖电泳和凝胶成像系统检测所提取的总RNA的完整性；将每例样本按所测浓度加水稀释成1ug/ul后，置于-80℃的冰箱中保存备用。 1.3.2 cDNA制备 取检验合格的RNA，按Fermentas公司逆转录试剂盒说明书进行cDNA合成，产物于-20℃保存。 1.3.3 实时荧光定量PCR反应 Cyclin B2的上、下游引物序列分别为5prime;CAGGAGACTCTGTACATGTGCG3prime;和5prime;TTCTCG GATTTGGGAACTGG3prime;，产物长度为195bp。根据试剂盒说明书操作，分别构建Cyclin B2和GAPDH的标准曲线。根据各自标准曲线计算出待测样本中初始mRNA相对表达量。 1.4 统计学分析 采用SPSS13.0统计软件对数据进行分析处理；各组计量资料数据用均数plusmn;标准差（meanplusmn;SD）表示；多组间均数的比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）；检验水准为0.05，Plt;0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 总RNA质量及基因测序 所有样本总RNA的OD260/OD280比