24例mlpa技术在快速检测胎儿染色体非整倍体异常中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 24例MLPA技术在快速检测胎儿染色体非整倍体异常中的应用 （南通市妇幼保健院产前诊断中心 江苏南通 226006） 【摘要】目的：探讨胎儿染色体非整倍体异常采用MLPA技术快速检测价值。方法：2015年5月-2016年5月，选择产前诊断标本224例，其中绒毛标本10例，脐带血标本70例，羊水标本144例。均行细胞遗传学分析及MLPA检测。结果：本次研究共选择224例产前诊断标本，经MLPA检测系统提示母血或69XXY污染的羊水2份，另2份羊水标本因具有的细胞量太少，实施检测后，DNA量太低，而不可对可信的结果获取。经细胞培养，再实施MLPA检测，上述4例样本为正常二倍体，在出具核型分析结果前，其他220份标本获得可信结果，并一致于细胞染色体核型所分析的相关结果，未出现假阴性及假阳性的情况，24h报告达98.2%临床符合率。采用MLPA进行检测，染色体整倍体异常标本14例，包括47XYY征1例，21-三体6例，13-三体1例，45X单体2例，18-三体4例。结论：针对产前诊断中的胎儿染色体非整倍体异常，采用MLPA技术进行快速诊断，获取的结果具较高准确性，且经济成本较低，通量高，应用前景十分广阔，值得临床深入研究。 【关键词】MLPA技术；胎儿染色体非整倍体异常；检测 【中图分类号】R714.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）22-0038-02 传统的染色体核型分析结果可靠准确，除可对染色体倍数改变检测外，还可检测染色体重组、缺失等结构改变，为染色体产前诊断一项金标准[1]。但此方法也有一定不足，如对技术水平要求较高、工作强度大，且有培养失败风险，故对稳定、快速、成本低的新方法探寻，是临床研究的重点。本次研究应用多重连接依赖式探针扩增（MLPA）技术，对胎儿染色体非整倍体异常进行检测，旨在探讨其价值，现回顾结果如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取224例产前诊断标本，其中绒毛标本10例，脐带血标本70例，羊水标本144例。均行细胞遗传学分析及MLPA检测，患者对本次实验均知情同意。 1.2 方法 1.2.1提取DNA 脐带血基因组DNA应用QuickGene-SPkit血液基因组所具有的提取试剂盒进行提取，绒毛基因组DNA采用TIANamp Gemomic组织基因组所具有的DNA提取试剂盒进行提取。 1.2.2处理羊水标本 对妊娠15～20周孕妇羊水标本抽取，抽取量为1.5ml，经13000rpm/min行5min离心操作，将上清弃除，取PBS缓冲液1ml加入，再次离心，上清在5min后弃除，取蛋白酶K加入，裂解30min，在下一步试验中应用。 1.2.3检测MLPA 应用（SALSA MLPA P095 Kit）染色体非整倍体检测试剂盒，含检测探针36对，除Y染色体上有4对外，X、18、21染色体均有8对，经杂交、扩增等步骤，促PCR产物生成。PCR产物变性后，于ABI3130遗传分析仪放置，行毛细管电泳，分离后，获取原始数据，经Genemapper4.0软件分析，获取含片段长度、峰面积、峰高等系列指数。 1.3 统计学分析 在Version5.01软件中导入Genemapper4.0软件导出数据，开展相关分析。此Version5.01软件先将每个产物峰的峰面积标准化，避免系统误差对结果产生的影响，而而对样本自身情况反应。样本标准化值与探针产物峰标准化平均值对比，获得标准差（s）及比值（Ratio），此比值为所获反应样本在DNA拷贝数上发生的变化。正常男性X染色体相关Ratio值范围为1.0plusmn;0.13，Y染色体为1.0plusmn;0.24；正常女性X染色体及正常二倍体样本13、18、21号染色体Ratio值正常范围为1.0plusmn;0.1，经分析不同染色体及Ratio值等，对数据差异性计划，P＜0.05时，为此染色体具非整倍性，可得出结论。 2.结果 从处理样本至样本分析完成，MLPA检测在24h内结束，检测探针PCR产物以136～454bp为长度范围，相邻产物间隔6～9bp。另有64～70～76～82bp分离产物中4个片段为DNA数量质控片段（DQ），对连接反应的发生无依赖，当初始DNA量＜100ng时，片段出现在图谱中，表明因模板量少，促使目的探针未充分杂交。另外，另一为92bp产物长度的连接依赖质控片段，用于对反应体系