荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建.pdfVIP

生物技术 中国畜牧兽医 2O10年第 37卷第 9期 荧光定量 PCR检测牛性别相关基因DAX1 表达的标准质粒和标准 曲线的构建 徐超 ，杜卫华 ，王宗礼 ，余大为。，王栋 ，郝海生 ，赵学明 ，朱化彬 (1．中国农业科学院草原研究所，呼和浩特 010010；2．中国农业科学 院北京畜牧兽 医研究所 ，北京 100193) 摘要 ：本研究根据 GenBank中登录的剂量敏感 的性别反转一先天性。肾上腺发育不 良基因 l(dosagesensitivesexreversal， adrenalhypoplasiacriticalregion，onchromosomex，gene1，DAX1)设计 引物 ，构建包含 DAX1基 因cDNA片段的质粒 ，作为 中国荷斯坦牛 DAX1基 因mRNA定量检测的标准品，建立 了DAX1基因mRNA表达实时荧光定量 PCR检测方法 。结果表 明，该方法特异性好 ，检测灵敏度达 1O拷 贝，线性范围为 1O。～10拷 贝，阂值循环数 (ct)与PCR体系中起始模板量 的对数值 间有着 良好 的线性关系(r一0．99975)，扩增效率高(E一1[)O )，可以作为检测牛 DAX1基凶 mRNA定量检测方法 。 关键词 ：牛生殖嵴 ；DAX1；荧光定量 PCR；TaqMan探针 ；标准 曲线 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 文章编号 2010)09—009406 剂量敏感的性别反转一先天性肾上腺发育不 良 1998)，参与类固醇组织发育和性别决定信号级联放 基 因 1(dosage—sensitivesexreversal，adrenalhypo— 大反应 ，是主导性别转换的重要基 因。Bernstein等 plasiacriticalregion，on chromosome X，gene 1， (1980)首先发现 X染色体短臂上一个 片段重组与 DAX1)，又称 Nr0B1(nuclearreceptorsubfamily0， XX性反转有关 ，Bardoni等 (1994)将该片段定位在 groupB，member1)，是编码核激素受体超家族 1 Xp21上的 106kb区段 内，并证实 XY性腺发育不 蛋 白的特殊成 员 (Nachtigal等 ，1998；Swain等 ， 全 的部分病例是 由于 Xp21片段重 复所造成 的。 Meeks等 (2003)研究结果表明，缺失 DAX1的XY 收稿 日期 ：2O10一O323 性反转小鼠的性腺都没有睾丸带 (雄性性别决定的 作者简介 ：徐超 (1985一)，男，山东人 ，硕士生，研究方 向：动物生 核心特征)，但有卵巢和雌性外生殖器却不会排卵。 物技术 与胚胎工程 。 DAX1在小 鼠生殖嵴 中的表达 与 Sry表达 时间一 通信作者 ：千宗礼 (1962一)，男 ，甘肃人 ，博士 ，研 究员，研究方 致 ，均为 11．5dpc(dayspostcoitum)，在正常情况 向：动物遗传育种与繁殖。Email：wangzongli@ si na．coITI 下 ，此基因被 Sry抑制 ，当精索发育时，在睾丸 中停 基金项 目：863项 目 (2007AA10Z154)；转 基 因 熏 大 々项 止表达 ，在卵巢 中则持续表达 ；但 当它有 2个活性拷 (2009ZX08007-007B：2009ZX08011一O31B) 贝时，可导致 Sry正常个体 XY性反转 ，提示 DAX1 … … ～ … … … … … ’ …