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RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖中作用 　 作者：吴宝安，梁力建，李威，宋香茹 【关键词】 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂；HepG2细胞；增殖；RhoA ［摘要］目的：探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中所起的作用。方法：用基因芯片、RT_PCR和Western blot检测洛伐他汀作用前、后HepG2细胞中RhoA的表达。结果：加入洛伐他汀后，mRNA(RhoA)和RhoA蛋白水平均上调；加入香叶基香叶基焦磷酸或法呢基焦磷酸后，RhoA蛋白水平上调被不同程度逆转。结论：减少RhoA香叶酯化，抑制RhoA的细胞膜锚着可能是洛伐他汀抑制HepG2增殖的机制之一。 　　［关键词］羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂；HepG2细胞；增殖；RhoA 　　［Abstract］Objective: To study the role of RhoA in lovastatin_inhibited proliferation of HepG2 cells. Methods: The cDNA microarray assay, RT_PCR and Western blot were carried to analyze the mRNA and protein expression of RhoA, respectively. Results: The mRNA and protein expression levels of RhoA were up_regulated in lovastatin_inhibited HepG2 cells. This response could be reversed by addition of geranylgeranyl pyrophosphate or farnesyl pyrophosphate in different degrees. Conclusion: RhoA isoprenylation inhibition and its delocalization from the cell membrane may be one of the mechanisms of lovastatin_inhibited anti_proliferation effect in HepG2 cells. 　　［Key Words］3_hydroxy_3_methyl glutaryl coenzyme A reductase inhibitor; HepG2 cell; proliferation; RhoA 　　羟甲基戊二酰辅酶A(HMG_CoA)还原酶抑制剂通称他汀类药物(statins)，广泛用于高脂血症的治疗。近年来statins的抗肿瘤作用日益受到重视。洛伐他汀有诱导头颈部鳞癌、甲状腺癌细胞凋亡的作用［1，2］。口服普伐他汀能延长晚期肝细胞癌患者中位生存期［3］。我们发现，洛伐他汀对人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖有抑制作用。RhoA(Ras相似物成员A，Ras homolog gene family，member A)属Rho家族蛋白的Rho亚家族成员，可通过多种信号途径参与调节细胞的生长、凋亡和细胞周期［4］。本研究旨在探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中的作用。 　　1 材料与方法 　　11 主要试剂、仪器 　　HepG2细胞系由中山大学附属第一医院外科实验室保存。洛伐他汀、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)和法呢基焦磷酸(FPP)购自美国ALEXIS公司；DMEM培养基(Gibco BRL公司，美国)；胎牛血清（杭州四季青公司，中国）；TRIzol、SuperScriptTM Ⅱ RNase H-Reverse Transcriptase(Invitrogen公司，美国)；RNeasyKit、QIAquick Nucleotide Removal Kit(QIAGEN公司，德国)；Cy5、Cy3（Amersham公司，英国）；5K基因表达谱cDNA芯片(上海生物芯片公司，中国)；ReverTra Ace_α_TM(TOYOBO公司，日本)；鼠抗人RhoA抗体(Santa Cruz公司，美国，南方医院李湘博士惠赠)；鼠抗人β_actin（武汉博士德公司，中国）；ECL化学发光液（PIRECE公司，美国）。DU800核酸/蛋白分析仪（BECKMAN公司，美国）；PCR仪(Applied Biosystems公司，新加坡)；酶标仪，UVP杂交炉（Thermo公司，美国）；扫描仪(Agilent公司，美国)；凝胶成像分析系统，SYnGENE化学发光、荧光检测数字成像系统(Synoptics公司，英国)；POWER Pac HcTM组合式电泳系统(Bi