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Rh弱D、Del检测及意义 　【摘要】 目的:探讨初筛为Rh(D)阴性样本中弱D、Del的检测及临床意义。方法: 采用常规血清学方法初筛Rh（D）血型，用微柱凝胶抗人球蛋白试验检测弱D，用吸收放散试验检测Del，用PCR-SSP法检测样本RhD基因8个外显子结构。结果: 常规血清学初筛Rh(D)阴性60例中经微柱凝胶抗人球蛋白试验确认为弱D4例，占6.67%；56例Rh（D）阴性标本经吸收放散试验后确认13例为Del，占21.67%；对其中2例弱D和5例Del标本的D基因8个外显子检测都完整存在，排除了弱D、Del的10例Rh（D）阴性标本其基因检测有完全缺失和部分缺失两种可能。结论: 为了临床输血安全，常规血清学检测Rh（D）阴性者，应当再用抗人球蛋白试验或吸收放散试验检测是否为弱D或Del。 【关键词】 Rh血型 吸收放散试验 D抗原 弱D Del Rh血型在临床输血中具有重要意义，也是人类红细胞血型系统中最为复杂、最具多态性的系统。D抗原抗体与输血的关系仅次于ABO血型，50%～75% Rh（D）阴性人接受Rh（D）阳性的血可能产生抗-D，导致免疫性输血反应。为了减少输血反应，正确检定Rh（D）阴性个体显得非常重要，现将我们的检测结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 对象 2006年1月-2007年4月在本院用单克隆抗-D检测为Rh(D)阴性的60例样本。 1.2 试剂和仪器 1.2.1 RhD试剂：A、B2种人源抗-D血清，由本科提供，抗-D效价为1：256和1：128；a、b、c三种单克隆（IgM+IgG）抗-D分别为加拿大Dominion公司（批号为NDMG04203）、德国Biotest公司（批号为1210905）和法国DIAGAST公司（批号为410000）产品，由长春博德生物技术有限责任公司提供，均在有效期内使用。 1.2.2 DNA制备：用TakaRa（大连宝生物工程有限公司产品）基因组DNA抽提试剂盒，扩增RhD基因2～7、9、10共8对外显子。 1.2.3 “0”型RhD(+)试剂红细胞：随机取已知Rh(D)阳性“O”型红细胞3份，洗涤3次后混合配成0.8%红细胞悬液，当天配制。 1.2.4 仪器：微柱凝胶抗球蛋白反应卡、专用孵育器、离心机均由瑞士达亚美公司提供。 1.3 方法 Rh（D）常规血型血清学初筛采用盐水试管法，按《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》操作；弱D检测采用微柱凝胶间接抗人球法，按照说明书操作；Del检测采用阴性标本与两种不同来源的人源抗-D血清(A、B)和三种不同批号的单克隆抗-D(a、b、c)作吸收放散试验，按《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》操作；D基因外显子检测采用序列特异性引物PCR（sequence specific primer polymerase chain reaction，PCR-SSP），按照说明书操作。 2 结果 初筛为Rh（D）阴性的60例样本，检出弱D 4例，占6.67%；排除弱D的56例Rh（D）阴性标本，检出Del型13例，占21.67%；其中2例弱D、5例Del型标本D基因8个外显子（2、3、4、5、6、7、9、10）检测都完整存在（见图1），排除了弱D、Del的10例Rh（D）阴性标本其基因检测有完全缺失和部分缺失（见图2）。 3 讨论 Rh血型中D抗原因能引起溶血性输血反应及新生儿溶血病而倍受重视，根据D抗原的数量和质量及抗原性不同的差异，可分为5种:D（常见的D抗原）、弱D（Weak D）、表位不完全型D（Partial D）、表位不完全型弱D、增强D。正常D(+)红细胞表面约有10 000～30 000个抗原表位，弱D型表位仅70～4 000个；弱D表现型的分子生物学基础主要是点变化引起的RhD膜内或跨膜区域而非细胞外的氨基酸改变，这些突变影响Rh（D）蛋白插入膜的效率，进而影响膜上的Rh（D）蛋白的数量，反映在这些红细胞上的表现是Rh（D）抗原数量的下降，这也是弱D表现型需要用间接抗人球蛋白试验来鉴定的原因。据文献报道，有0.2%～1%的人和更多的非洲裔美国人D抗原减弱[1]；本资料发现4例弱D表现型，即盐水法凝集反应为阴性，而微柱凝胶间接抗人球法阳性，占初筛Rh（D）阴性的6.67%，与文献[2]报道基本一致。 　 Del型有非常弱的D抗原，是一种只能通过吸收放散试验才能检出的Rh（D）血型，还可以在约20%的Rh阴性个体中检出[3]。文献报道称此个体在湖北地区占22.67%[4]，海南地区占29.25%[5]，云南地区占20.65%[6]，安徽地区占15.6%[7]；本组资料中Del型占21.67%，与云南地区和湖北地区比例基本一致，低于海南地区比例，略高于安徽地区比例，提示Del型分布存在一定的地