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hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中表达 　 作者：王宾 沈来根朱越锋 李鲁滨 郭治宇 刘振杰 【摘要】 目的 培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。 方法 体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。 结果 通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞, RT-PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。 结论 成功培养兔体外骨髓间充质干细胞, 基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。 【关键词】 目的 培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。 方法 体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。 结果 通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞, RT-PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。 结论 成功培养兔体外骨髓间充质干细胞, 基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。 　　【Abstract】 Objective To cultivate and accredit rabbit mesenchymal stem cells ,and to detect the expression of hVEGF165 after gene transfection. Methods Rabbit mesenchymal stem cells was accredited expression of antigen CD29、CD44、CD45、HLA-DR after cultivated in vitro. The constructed plasmids containing right sequence of hVEGF165 were transfected into rabbit mesenchymal stem cells by adenovirus.The expression of hVEGF165 was tested by RT-PCR and western-blot. Results The expression of antigen of cells indicated the cells were rabbit mesenchymal stem cells. The results of RT-PCR and western-blot showed that the transfected cells could express hVEGF165. Conclusion The rabbit mesenchymal stem cells can successfully express hVEGF165 after gene transfection. 　　【Key words】 mesenchymal stem cells vascular endothelial growth factor ( VEGF) gene transfection, expression 　　骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一种具有多向分化潜能的细胞，可分化成多种间质细胞，如成骨细胞，软骨细胞，脂肪细胞，也可分化成神经系统的神经元细胞、神经胶质细胞和脉管系统的血管内皮细胞,成为近年来基因组织工程研究的热点。血管内皮生长因子(VEGF) 是一种高特异性的内皮细胞有丝分裂原, 能促进血管内皮细胞分裂、增殖, 形成新血管［１］。本研究通过体外培养兔骨髓间充质干细胞,用基因转染技术将VEGF基因导入细胞, 观察其在细胞中的表达。在此基础上可将骨髓间充质干细胞与VEGF结合植入缺血区, 通过MSCs与VEGF的双重作用, 来促进局部血管增生,治疗慢性缺血性疾病。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 (1)细胞和腺病毒:兔骨髓间充质干细胞自行培养和鉴定,含hVEGF165的非扩增型腺病毒和含GFP的非扩增型腺病毒购自上海××生物基因科技发展有限公司。(2)主要试剂：DMEM培养液和淋巴细胞分离液购于上海××生物有限公司；胰酶购自杭州×××公司; TRIZOL购自Sigma公司;mRNA逆转录酶（M-MLV