ICAM1在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中作用.docVIP

ICAM1在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病机制中作用 　 作者：赵亚朴 王红 刘慧敏 王秀卿 黄庆军 【摘要】 目的 检测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血脑屏障中血管内皮细胞细胞间粘附分子1(ICAM1)的表达，并分析其表达与EAE发病的关系。方法 取EAE组和对照组大鼠的脑组织，石蜡切片，免疫组化染色，图像扫描系统观测，图像分析软件进行灰度分析。结果 EAE组大鼠脑血管内皮细胞上ICAM1的表达明显深于对照组。实验组的灰度值为141.47±6.88，而对照组为166.24±7.24，两组差异非常显著(Plt;0.01)。结论 大鼠EAE时脑血管内皮细胞ICAM1的表达上调，提示ICAM1是与EAE发生相关的重要粘附分子。 【关键词】 免疫组织化学法； ICAM1； 血脑屏障； 实验性自身免疫性脑脊髓炎 【Abstract】 Objective To investigate the relationship between the expression of ICAM1 in the bloodbrain barrier and the experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE). Methods Brain of EAE as well as control animals were taken and embedded in paraffin.And the sections were stained by immunohistochemical method. Then the sections were observed by Nikon image scanning system and measured the gray value by IPP image analysis software. Results The expression of ICAM1 in the epithelial cell of endangium of EAE rat’s brain was higher than that in control. Conclusion The increase of the expression of ICAM1 in the epithelial cell of endangium of EAE rat’s brain indicated that ICAM1 was a necessary adhesion molecule in the developmental process of EAE. 【Key words】 Immunohistochemical method；Intercellular adhesion molecular1；Bloodbrain barrier；Experimental autoimmune encephalomyelitis 多发性硬化症(multiple sclerosis，MS)可能是一种与遗传、病毒感染、地理环境等诸多因素有关的自身免疫性疾病［1］。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)与MS在临床、生化、免疫及病理等诸多方面具有相同的特征，因此成为深入研究MS的理想动物模型。在免疫学的研究中，粘附分子在EAE发病中的作用越来越受到关注。那么，血管内皮细胞细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecular1，ICAM1)在血脑屏障中的表达是否与EAE的发生有关？本研究采用免疫组化法检测了ICAM1在血脑屏障中的表达，以探讨其与EAE发病的关系。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物及分组 雌性Wistar大鼠50只，8～10周龄，体重(192±10)g，随机分为实验组(免疫抗原组)和对照组(完全弗氏佐剂/百日咳杆菌组)。实验组注射牛髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein，MBP)+完全弗氏佐剂(Freund’s adjuvant complete，CFA)+百日咳杆菌；对照组注射生理盐水+CFA+百日咳杆菌，每组各25只。 1.1.2 试剂 ICAM1羊抗鼠IgG多抗(Santa Cruz)、SP通用型试剂盒(ZYMED)。 1.2 方法 1.2.1 制备动物模型 MBP提取方法与动物模型制备方法沿用我们以往建立的方法［2］。EAE的严重程度依据Kono等［3］的标准评定。 1.2.2 免疫组化法检测血脑屏障ICAM1的表达 取发病高峰期的EAE大鼠和对照组大鼠各7只，剥取大鼠的小脑，福尔马林固定