ADM诱导MCF-7耐药后细胞免疫表型改变及临床意义.docVIP

ADM诱导MCF-7耐药后细胞免疫表型改变及临床意义 　【摘要】 目的 探讨ADM诱导MCF-7耐药后细胞免疫表型的改变及临床意义。方法 将人乳腺癌细胞株分为三组：MCF-7（野生组）、MCF-7/ADM（阿霉素诱导的耐药组）、MCF-7/撤药60天（撤药60天组），S-P免疫组化法检测细胞表型变化。结果 MCF-7/ADM的耐药相关标志蛋白P-gp、LRP、GST-π及HER-2表达较MCF-7明显增加，而雌激素受体（ER）、TOPO-Ⅱ转为阴性表达，孕激素受体（PR）随撤药时间的延长表达逐步减低。结论 耐药细胞的遗传和免疫表型发生了变化，药物作用的靶酶表达或靶功能发生了改变，部分撤药后不能逆转。 【关键词】 多药耐药相关蛋白；人类表皮生长因子受体；雌激素受体；孕激素受体；免疫组化染色 ［Abstract］ Objective To investigate immunophenotype change of drug-resistant human breast carcinoma cell line MCF-7 induced by adriamycin.Methods Immunophenotype alteration of MCF-7（wild group），MCF-7/ADM（MCF-7 exposed to ADM） and MCF-7/60day（withdrawal group，60 days after exposure） was detected by using SP immunohistochmistry method respectively.Results The expression of drug resistance associated marker of MCF-7/ADM cells such as P-gp，LRP，GST-π，HER-2 was higher than MCF-7，ER and TOPO-Ⅱ turned to express negatively.Expression of PR decreased gradually after withdrawal.Conclusion MCF-7 cells exposed to ADM got characterization of drug resistant and their immunophenotype alteration could not be reversed after withdrawal. ［Key words］ multidrugresistance；human epidermal growth factor receptor-2；estrogen receptor；progesterone receptor；immunohistochemistry 乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，复发率和转移率高，全世界每年约有120万妇女发病，有50万妇女死于乳腺癌。化学药物疗法是治疗乳腺癌的主要手段之一，但肿瘤细胞产生的多药耐药常使化疗难以奏效并最终导致化疗失败。肿瘤耐药异常复杂，是多基因、多步骤综合作用的结果，我们从多药耐药后乳腺癌细胞免疫表型的改变，对乳腺癌细胞多药耐药的机制进行了研究。 1 材料与方法 1.1 材料 细胞株：MCF-7培养于含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养液中，细胞传代时用含0.25%胰蛋白酶进行消化，采用低浓度加量诱导法［1-2］诱导亲本MCF-7细胞，阿霉素（ADM）对亲本MCF-7 IC50的1/10为起始浓度，逐步提高细胞培养液中的ADM浓度，待每个ADM浓度细胞稳定生长后再逐步提高药物浓度，同时监测ADM对细胞的IC50。 MCF-7人乳腺癌细胞购于ATCC公司，RPMI1640为Gibco公司产品，胰蛋白酶、小牛血清为华美生物工程公司产品，胰岛素注射液为上海生物化学制药厂生产，人P-gp、LRP、GST-π、TOPO-Ⅱ、ER、PR免疫组化试剂为福州迈新生物技术公司产品。 1.2 方法 把细胞株分成三组：MCF-7、MCF-7/ADM、MCF-7/撤药60天，涂片后进行免疫组织化学染色。把细胞均匀涂在经多基赖氨酸处理的载玻片上，采用S-P法，所用一抗为P-gp、LRP、GST-π、TOPO-Ⅱ、ER、PR。阳性定位：P-gp、LRP核膜/胞浆、GST-π胞浆，TOPO-Ⅱ、ER、PR胞核，HER-2胞膜；判断标准：P-gp、LRP、GST-π阳性（++）以上为耐药，TOPO-Ⅱ（-）/（+）为耐药，ER、PR阳性细胞数gt;10%为阳性表达。 2 结果 免疫组织化学结果，见表1。 MCF-7多药耐药相关蛋白P-gp、LRP、GST-π及