吉林大学实验课件-2014PAS反应（动植物）理论.pptVIP

PAS反应 实验目的 1．观察细胞内糖类的分布。 2．掌握糖类的染色方法。 实验原理 组织内的多糖、粘多糖及粘蛋白等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过碘酸的氧化作用。过碘酸是一种强氧化剂，能破坏各种结构内的C-C键，若有1，2乙-二醇基（CHOH-CHOH）存在，可变为二醛（CHO-CHO），然后与Schiff试剂反应，与Schiff试剂生成紫红色反应物。过碘酸较常用的氧化C-C键的试剂（KmnO4、H2CRO4、H2O2等）灵敏而优越，不再氧化所产生的醛基，与Schiff试剂生成紫色反应物以此得到定位。 PAS反应原理示意图 PAS反应的应用  1．证明与鉴别细胞内空泡变性，是脂肪变性还是糖原的脱失。 2．心肌病变与其它心血管疾病的诊断与研究。 3．糖尿病在肝脏、肾脏内均有大量糖原沉积。 4．某些肿瘤的鉴别诊断，如肝细胞癌糖原反应阳性。 实验用品 （一）器材 显微镜，染色缸，盖玻片。 （二）试剂 1%过碘酸，Schiff试剂，0.5%偏重亚硫酸钠溶液， 100％乙醇，95％乙醇，二甲苯。 （三）材料 鼠的肝、肾、心肌、脾、马铃薯。 实验步骤(动物) 1．取小鼠的肝、肾、心肌1~2mm厚组织块，利用Carnoy固定液固定，经乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋；切片脱蜡至复水。 实验步骤(动物) 实验步骤(动物) 如需制作永久切片，需进行以下步骤： 上述步骤蒸馏水吸干后，95％酒精浸泡1～2分钟，无水乙醇浸泡两次，每次3～5分钟进行脱水。然后利用二甲苯和无水乙醇等量混合5分钟，再换二甲苯两次每次5分钟，最后中性树胶封藏。 结果 含糖蛋白呈不同程度的紫红色，糖原着色深。对照片中呈阴性反应的，PAS片中深染的块粒为糖原。 实 验 步 骤(植物) １.取马铃薯，使用徒手切片技术切一薄片置于载玻片上 ２．滴一滴0.5%~1%过碘酸水溶液浸泡２~３min（不能过长）。 ３． 蒸馏水洗。 ４．Schiff试剂浸泡４ ~ ６min（避光)。 ５．亚硫酸盐溶液浸泡三次，共6min ６．染色结束，蒸馏水洗去染料，盖上盖玻片，显微镜下观察。 实验结果:在显微镜下观察到马铃薯细胞中的糖颗粒被染成粉红色 注意事项 染色的深度取决于过碘酸处理的时间，切片在过碘酸水溶液中不能放太长时间。 PAS反应后，因过碘酸氧化加速苏木精的染色，染色时间可减少一半，常用苏木精稀染液复染。 * * 0.5%~1%过碘酸水溶液浸泡2~5min（不能过长）。 滴加Schiff试剂浸泡15min（避光） 蒸馏水洗 自来水冲洗5min。 蒸馏水浸泡1min 亚硫酸盐溶液浸 泡三次，共6min 苏木精复染胞核（约5～10分钟） 流水洗5min 镜检 小鼠肝脏