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JLU 小鼠骨髓染色体的制片与观察 王飞 fei@jlu.edu.cn 核型分析* 核型（karyotype）是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。 核型具有明显的种属特异性。 血淋巴细胞是动物和人的核型分析最常用的素材。 三个关键技术：低渗处理，秋水仙素处理，植物凝集素（PHA）处理。 骨髓细胞染色体制片的意义 动物骨髓中的造血干细胞是各种血细胞的来源，具有很强的分裂能力。且便于获取，是动物染色体核型分析的理想材料。 与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的优势，无需PHA处理即可用于核型分析。 实验目的 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数 实验材料及流程 * 小鼠 2n=40 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片-染色-水洗-镜检 1 秋水仙素处理 * 原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。 方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循环。 2 收集骨髓细胞 * 收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞 2 收集骨髓细胞 * 用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞 目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。 3 低渗处理 * 目的：营造低渗环境，使细胞内张力增大，细胞更容易破裂，染色体更分散。 低渗液配方：0.075M KCl溶液（0.56%） 盐浓度与渗透压 * 4 固定 目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应，维持细胞结构不变。 固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1 5 滴片 * 目的：使细胞膜破裂，细胞核或核内染色体分散在载玻片上。 原理：滴片时产生的剪切力破坏细胞膜。预冷的玻片使得液体的表面张力增加，液层更薄，有利于细胞的破裂和染色体的分散。 6 染色 染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异染料 步骤： 1 滴加染色液覆盖全部细胞 2 染色5min 中期分裂相特点 * 染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 可见三种形状的中期染色体 镜检结果 JLU
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