吉林大学实验课件-胡鑫-2014微生物学大实验.pptVIP

实验原理 菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺、石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。 微生物菌种的保藏 试剂与器材 1、材料 各种需要保藏的菌种及相应的培养基、河砂、瘦黄土或红土。 2、试剂 EDTA、NaAc、10mmol/LTris、液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95%乙醇、10%盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰。 3、器材 无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿、安瓿瓶、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条、干燥器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、 微生物菌种的保藏 斜面低温保藏 这是一种常用的而且是最简便的保藏方法。首先将要保藏的菌种移接到适宜的斜面培养基上。一般采用营养丰富的半合成培养基，如PDA培养基，麦芽汁琼脂培养基等。为了减少培养基水分蒸发，延长保藏时间，可将琼脂用量加到20%。在这些培养基中，最好再加入少许0.2%的K2HP04、KH2PO4、CaCO3等缓冲剂，以中和菌种在保藏过程中产生积累的有机酸。 用适宜温度培养至菌丝长满斜面，选择菌丝生长健壮的试管，先用硫酸纸包扎好管口棉塞，再将若干支试管用牛皮纸包好。 微生物菌种的保藏 液体石蜡保藏 ?? 将要保藏的菌种接入前面介绍的马铃薯半合成培养基上，培养至菌丝长满斜面，选择生长健壮的备用。然后选用化学纯的液体石蜡装入三角瓶内，装至瓶体的１/3处，塞上棉塞后包扎，１kg/cm2灭菌１小时。灭菌后，放在40℃恒温箱中，使水分蒸发至石蜡液透明为止。冷却后在无菌箱(室)内，以无菌操作方法，用无菌吸管分别注入待保存的各个试管菌种内，注入量以淹过斜面1cm为宜。 然后塞以橡皮胶塞，用蜡封口，直立于试管架上，放入4℃冰箱中或常温下保藏。此法可保藏5～7年，但最好1～2年移植一次。使用时，不必倒去石蜡油，只要用接种针从斜面上挑取小块菌丝即可(但要尽量少带石蜡油)。余下的母种可继续保藏。由于挑出移接的菌丝块沾有石蜡，故生长微弱，必须转接几次才能恢复正常。 微生物菌种的保藏 砂土管保藏法 河砂处理 取河砂若干加入盐酸10% ，加热煮沸30min除去有机机质。倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。 土壤处理　 取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。烘干后碾碎，用100目筛子过筛，粗颗粒部分丢掉。 砂土混合 处理妥当的河砂与土壤按3：1的比例掺合(或根据需要而用其他比例，甚至可全部作砂或土)均匀后，装入10x100mm的小试管或安瓿管中，每管分装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌(通常采用间歇灭菌2--3次)，烘干。 微生物菌种的保藏 无菌检查 每10支砂土管随机抽1支，将砂土倒入肉汤培养基中，30℃培养40h，若发现有微生物生长，所有砂土管则需重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌后方可使用。 菌悬液的制备 取生长健壮的新鲜斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18x180mm 的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成菌悬液。 分装样品 每支砂土管(注明标记后)加入0．5ml菌悬液(刚刚使砂土润湿为宜)， 用接种针拌匀。 微生物菌种的保藏 干燥 将装有菌悬液的砂土管放入干燥器内，干燥器底部盛有干燥剂。用真空泵抽干水分后火焰封口(也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口)。 保存 置4℃冰箱或室温干燥处，每隔一定的时间进行检测。此法多用于产芽孢的细菌、产生孢子的霉菌和放线菌。在抗生素工业生产中应用广泛、 效果较好，可保存几年时间，但对营养细胞效果不佳。 微生物菌种的保藏 注意事项 1、实验操作要严格无菌。 2、需保藏的菌种需是生长健壮的菌种。 3、各种保藏方法的有效时间不同，时间到了以后要及时的进行菌种活化后再进行菌种保藏。 微生物菌种的保藏 细菌生长曲线的测定 实验目的 1、了解细菌生长的特点及测定原理，掌握其生长规 律，绘制生长曲线。 2、掌握光电比浊法测量细菌数量的方法。 细菌生长曲线的测定 实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养