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高效毛细管电泳测定 阿司匹林中的水杨酸 吉林大学公共化学教学中心 阿司匹林是乙酰水杨酸,它为一常用解热镇痛药, 是世界上应用最广泛的药物之一。 但是由于阿司匹林在生产过程中乙酰化不完全,或在贮存期间阿司匹林水解都会产生水杨酸。水杨酸对人体有毒性。 实验意义 阿司匹林 水杨酸 1.掌握毛细管电泳法的基本原理、 结构与使用方法。 2 . 掌握紫外吸收光谱检测方法。 3.测定阿司匹林中的水杨酸。 实验目的 毛细管电泳又称高效毛细管电泳(HPCE),是一种仪器分析方法。通过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管,对液体中离子或荷电粒子进行分离。特点:高效、快速和样品用量少、成本低。 HPCE已广泛应用于氨基酸、蛋白质、DNA等生物分子分离分析,药物分析,临床分析,无机离子分析,有机分子分析,糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分离分析。 人类基因组工程中DNA的分离是用毛细管电泳仪进行的。 毛细管电泳简介 毛细管柱分离原理图 EOF是在电渗力驱动下毛细管中整个溶液整体朝一个方向流动 粒子V由荷电粒子在外电场作用下发生的定向电泳迁移(Vep) 管内大量电荷移动产生的EOF(Veo) V = Vep + Veo 毛细管电泳装置示意图 本采用的是单波长(210nm)紫外检测器。 定量分析的依据是朗伯-比耳定律: A=lg(I0/I) 式中A为吸光度,I0为入射光强度,I为经检测物吸收后的透射光强度。 在固定的实验条件下 A = K c 提问:定性的依据? 定量的依据? 紫外检测 检测波长的选择 电泳缓冲液的配制 使用含2mM的硼砂和4mM十二烷基硫酸钠(SDS)的分离缓冲液。 阿司匹林片的配制 将5片药片研碎, 将其倒入烧杯中,加去离子水30ml,超声溶解10分钟,上层清液用0.45μm滤头过滤后转移入100mL容量瓶,定容后备用。 实验前期准备工作 实验过程 1 标准曲线的绘制 配制系列水杨酸标准溶液 (5,20,50,150,300ppm) 2 测定阿司匹林中水杨酸含量
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