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高效液相色谱法 测定饮料中咖啡因含量 吉林大学化学教学中心 咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称 1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人兴奋。咖啡中含咖啡因1.2%-1.8%，茶叶约含2.0%-4.7%。可乐、APC药片中均含咖啡因。其分子式为：C8H10O2N4,结构式为 实验意义 1.了解HPLC测定咖啡因的基本原理； 2 . 掌握高效液相色谱仪的操作； 3.掌握HPLC法进行定性及定量的基本方法; 4.掌握标准曲线定量法。 实验目的 高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱” 。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的检测物通过单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 高效液相色谱(HPLC)简介 高效液相色谱法的分离原理 基本原理：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术； 流动相：携带样品流过整个系统的流体； 固定相：静止不动的一相，色谱柱。 反相模式（RP）的相互作用力 C18(ODS,十八烷基硅烷键合相硅胶(ostade-cylsilane) 疏水性 液相色谱简易流程图 检测波长：275nm 六通阀进样器 转动手柄 咖啡因标准溶液的配制: 1.配制1000mg/mL咖啡因储备液 2.分别用吸量管吸取1000mg/mL咖啡因储备液0.25、0.5 、1.0、2.0、3.0mL于5只50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。 样品前处理： 1.可乐（脱气除二氧化碳） 2.咖啡（用水定容） 3.干过滤 4.0.45mm 滤膜过滤 实验前期准备工作 实验过程 1.将已配置的浓度不同的咖啡因标准溶液进入色谱系统，以紫外检测器检测，绘制出标准曲线。 2 . 进样品样，利用外标法测定样品中咖啡因的含量。
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