分析荣骨定痛膏对骨性关节炎模型大鼠造成的影响.docVIP

分析荣骨定痛膏对骨性关节炎模型大鼠造成的影响 　　骨性关节炎(osteoarthritis，OA)是一种慢性进行性骨关节功能与结构退行性疾病，属于临床常见病，目前尚缺乏有效的根治措施，作为非手术疗法的中医药在治疗慢性退行性疾病过程中显示出独特的疗效而日益受到人们的重视。OA 属于中医“痹证”的范畴，多因肾气亏虚、关节失养，复受风寒湿邪，气血痹阻，经络不畅而发，治则为补益肝肾、活血通络、祛风散寒、胜湿止痛。在上述中医药理论指导下形成的荣骨定痛膏在临床上取得了较好的疗效。本研究通过复制OA大鼠模型，考察荣骨定痛膏对OA 大鼠膝关节结构与功能、关节腔内的炎性细胞以及对血清白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白介素-1beta;(interleukin-1beta;，IL-1beta;)与肿瘤坏死因子-alpha;(tumor necrosis factor-alpha;，TNF-alpha;)的影响，探讨荣骨定痛膏防治OA 的作用及机制，为临床用药提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药物与试剂 　　荣骨定痛膏(靖远县中医院，批号每毫升软膏剂含原生药1.5 g);盐酸氨基葡萄糖胶囊(浙江诚意药业有限公司，批号规格：240 mg);木瓜蛋白酶(美国Sigma 公司，批号118K1461);IL-1beta;(批号、IL-6(批号与TNF-alpha;(批号试剂盒均购于北京华英生物技术研究所。 　　1.2 动物与分组 　　SPF 级，♂，SD 大鼠，体质量180~220 g，质量合格证号：62001000000033，由甘肃中医学院实验动物中心提供， 动物生产许可证号：SCXK(甘)2011-0001。SPF 级实验室，许可证号：SYXK(甘)2011-0001。48 只SD 大鼠，随机分为6组，即正常对照组，模型对照组，氨基葡萄糖组(90 mg·kg?1)，荣骨定痛膏高、中、低剂量组(120，60，30 mg·d?1)。 　　1.3 仪器 　　TGL-16G 高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);N-5600PC 型METASH 可见分光光度计(上海元析仪器有限公司);HH-S 型恒温水浴锅(金坛市正基仪器有限公司);BS1103 电子天平(北京赛多里斯有限公司)。 　　1.4 造模与给药 　　各组大鼠膝关节周围及上下0.5 cm 处皮肤脱毛，参照相关实验方法[3-4]，在造模的第1，3，7天，将4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液50 mu;L 注入大鼠膝关节腔内，正常对照组注射等量生理盐水。造模的同时给药，荣骨定痛膏高、中、低剂量组在大鼠膝关节及上下0.5 cm 处涂抹不同浓度(1.500，0.750，0.375 g·mL?1)的荣骨定痛膏40 mu;L(即60，30，15 mg)，氨基葡萄糖组灌胃0.9%氨基葡萄糖5 mL·kg?1(即45 mg·kg?1)，正常对照组与模型对照组膝关节涂抹蒸馏水，2 次·d?1，连续5 周。 　　1.5 指标检测 　　末次涂药2 h，麻醉大鼠后测量被动膝关节活动度;之后采血，测定IL-6、IL-1beta; 与TNF-alpha; 的水平;取血后处死大鼠，抽提关节腔灌洗液，离心，取其沉淀混悬液制片，在光镜下分类计数炎性细胞并对其进行半定量分析;刮取关节面上的滑膜组织，测定关节滑膜厚度。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS 11.5 统计软件进行分析，实验数据采用x ? s表示，组间比较采用单因素方差分析，半定量资料采用Ridit 分析，Plt;0.05 表示差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 荣骨定痛膏对OA 大鼠膝关节活动范围及关节滑膜厚度的影响与正常对照组比较，大鼠膝关节注射木瓜蛋白酶35 d 后，膝关节的活动范围明显缩窄，关节滑膜肿胀厚度明显增加(Plt;0.01);与模型对照组比较，经荣骨定痛膏防治后，膝关节的活动范围扩大，关节滑膜肿胀厚度明显减小(Plt;0.05 或0.01);与荣骨定痛膏低剂量组比较，荣骨定痛膏高剂量组的防治作用更强(Plt;0.05)，显示出一定的量效关系。 　　2.2 荣骨定痛膏对OA 大鼠关节液中炎性细胞的影响对关节灌洗沉淀混悬液中的炎性细胞数目分级结果显示，与正常对照组比较，注射木瓜蛋白酶后关节腔内的炎性细胞明显增加(Plt;0.01);与模型对照组比较，经荣骨定痛膏治疗后，关节腔内的炎性细胞数有所减少，其中荣骨定痛膏高剂量组差异有显著性(Plt;0.05)。 　　2.3 荣骨定痛膏